僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

                               人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

通用名稱：人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

英文名稱：Human VEGF ELISA Kit

【包裝規(guī)格】

48T/96T

【預(yù)期用途】

僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

需要但未提供的材料及耗材：

1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和hrp標記抗體，有效期為14天，其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

半自動的酶標儀，如thermo mk3，或者國產(chǎn)酶標儀。

【樣本要求】

樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

3、血漿：肝素，edta，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。

樣本保存和穩(wěn)定性：

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

試劑準備

1、使用前，所有的組分都要至少復(fù)溫30min，確保充分復(fù)溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

3、底物：底物液a和b，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。

操作程序：

1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。

2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設(shè)置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μl，樣本孔加待測樣本50μl，空白孔不加。

5、除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μl。

6、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

7、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。

8、如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。

9、將底物a和b按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μl。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。

10、所有孔加入終止液50μl，在酶標儀上讀取各孔吸光度（od值）。

【檢驗結(jié)果的解釋】

檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應(yīng)的吸光度（od值）作為橫坐標，利用計算機軟件，采用四參數(shù)logistic曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（od值），利用方程計算樣品的濃度值。

如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的最終濃度。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測定。

6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。

7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。

技術(shù)提示：

1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。

6、實驗中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理：

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責(zé)任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。

【基本信息】

企業(yè)名稱：上海將來實業(yè)股份有限公司

生產(chǎn)地址：上海市楊浦區(qū)五角場高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)園區(qū)

固定電話：021-60496032 / 60484409

傳真號碼：021-55660885 

網(wǎng)   址：www.jonln.com

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郵   箱：shjlsw@163.com

公司簡介：

江萊生物（中國老牌ELISA試劑盒供應(yīng)商）
“江萊生物”10年以來一直致力于免疫學(xué)技術(shù)的積累與沉淀，目前江萊生物實驗室占地約3000平米，技術(shù)研發(fā)團隊50余人，配備了全球最先進的分析和檢測設(shè)備，我們通過自主創(chuàng)新以及與國內(nèi)外的科研單位合作研發(fā)，不斷突破新技術(shù)，目前我們研發(fā)了上千種指標，質(zhì)量成熟，并長期出口到歐美市場，贏得了眾多科研機構(gòu)的認可。
產(chǎn)品質(zhì)量：
我們嚴格選擇國內(nèi)外最頂尖的原材料并反復(fù)測試，以確保每個產(chǎn)品的源頭都是高品質(zhì)的，我們承諾：如有產(chǎn)品質(zhì)量問題，我們免費為用戶退換，直到客戶滿意。
試用裝：
目前市場魚龍混雜，但江萊生物堅持初心，愿做科研行業(yè)的一股清流，誠心推出24T免費試用裝，讓用戶對我公司的產(chǎn)品品質(zhì)和服務(wù)有更全面的了解。
技術(shù)支持：
我們技術(shù)團隊有博士7人，研究生26人，強大的技術(shù)研發(fā)保證了我們售前售后的及時性，我們?nèi)烫峁┟赓M指導(dǎo)，如有必要，可免費上門售前售后。
特色服務(wù)：
公司在上海、江蘇、浙江、廣東、天津等主要城市設(shè)立了分支機和研發(fā)基地，需免費代測服務(wù)的用戶，約定時間，我們可以48小時內(nèi)上門取樣，為客戶提供方便，我們勵志打造江萊生物全國知名品牌形象。