胃蛋白酶（Pepsin）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/48S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定 

測(cè)定意義：

胃蛋白酶由胃粘膜主細(xì)胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃 炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二指腸炎等癥狀時(shí)也會(huì)引起胃蛋白酶分泌的減少。

測(cè)定原理： 

胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍(lán)色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃 蛋白酶活性呈正比。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰 和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試 劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即粗酶液。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 580nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三和試劑四置于 37℃水浴預(yù)熱 30min。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μl 標(biāo)準(zhǔn)品，40μl 試劑二，120μl 試劑五，20μl 試劑六，混 勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μl 蒸餾水，40μl 試劑二，120μl 試劑五，20μl 試劑六，混 勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)空白管。 

5. 對(duì)照管：取 EP 管，加入 100 μl 蒸餾水，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 100μl 試劑四，蓋緊后搖勻 1min；加入 20μl 粗酶液，混勻后 8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μl， 再加入 40μl 試劑二，120μl 試劑五，20μl 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 空白管。

6. 測(cè)定管：取 EP 管，加入 20μl 粗酶液，100μl 試劑三，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 100μl 試劑四， 蓋緊后搖勻 1min；8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μl，再加入 40μl 試劑二，120μl 試劑五，20μl 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。