丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量試劑盒說明書
分光光度法
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質;后者逐漸分解為一系列復雜的化合物,其中 包括 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。
測定原理:
MDA 與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產物,在 532nm 有最大吸收峰,進行 比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量;同時測定 600nm 下的吸光度,利用 532nm 與 600nm 下的吸光度 的差值計算 MDA 的含量。
注意事項: 臨用前注意試劑一是否完全溶解,如未溶解,可以 70℃-90℃加熱,并振蕩以促進溶解。
需自備儀器和用品:
可見分光光度、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
MDA 提?。?/span>
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(10 4個): 提取液體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液),超聲波破碎細菌或 細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰 上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提 取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
血清(漿)樣品:按照血清(漿):提取液體積(ml)為 1:1 的比例,充分混合。8000g 4℃離心 10min, 取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、吸取 0.5ml 試劑一于 2ml 離心管中,再加入 0.5ml 樣本, 混勻。
2、95℃水浴中保溫 30min(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g,25℃,離心 10min。
3、吸取 1ml 上清液于 1ml 玻璃比色皿中,測定 532nm 和 600nm 處的吸光度,記為 A532 和 A600, ΔA= A532-A600。
關鍵字: 丙二醛(MDA)檢測試劑盒;
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