糖原含量試劑盒說明書
分光光度法 50管/48樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
糖原是由葡萄糖單位構成的高分子多糖,是糖的主要的儲存形式之一,主要貯存在肝和肌肉中作為備 用能量,分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度,當血糖升高時可在肝臟合成糖原,血糖降低 時,肝糖原則分解為葡萄糖以補充血糖。因此,肝糖原對維持血糖的相對平衡十分重要。肌糖原是肌肉中 糖的儲存形式,在劇烈運動消耗大量血糖時,肌糖原不能直接分解成血糖,必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循 環(huán)到肝臟,通過糖異生轉變?yōu)楦翁窃蚱咸烟恰?nbsp;
測定原理:
蒽酮法。利用強堿性提取液提取糖原,在強酸性條件下利用蒽酮顯色劑測定糖原含量
自備儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。
糖原提取:
1﹑細胞或細菌:收集 500~1000 萬細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;加入 0.75ml 提取液超聲波破碎 細菌或細胞(功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);轉移至 10ml 試管中,95℃水浴 20min (蓋緊,防止水分散失),隔 5min 振搖試管 1 次,使充分混勻;取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到 5ml, 混勻,8000g 25℃離心 10min,取上清液待測。
2﹑組織:稱取 0.1~0.2g 樣品,加入 0.75ml 提取液充分勻漿;轉移至 10ml 試管中;95℃水浴 20min(蓋緊, 防止水分散失),隔 5min 振搖試管 1 次,使充分混勻;待組織全部溶解后,取出試管冷卻后,用蒸餾水 定容到 5ml,混勻,8000g 25℃離心 10min,取上清液待測
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