苯胺-4-羥化酶（AH）活性測定試劑盒說明書 

微量法 100 管/48 樣 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

細(xì)胞色素 P450 酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和 毒物的代謝。AH 在 P450 酶系中相當(dāng)于 CYP2E1 亞型，CYP2E1 不僅參與了藥物的代謝，而且還能催化多 種前致癌物和前毒物的活化過程。

測定原理：

AH 催化苯胺羥化后產(chǎn)生的 4-氨基酚，進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)榉?/span>-吲哚復(fù)合物，在 630nm 處有特征吸收峰；通 過測定 630nm 吸光度增加速率，來計算 AH 活性。

自備儀器和用品： 

普通離心機(jī)、超速離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、雙蒸水和冰。

粗酶液提?。?nbsp;

1、除去細(xì)胞核，線粒體等大分子物質(zhì)：稱約 0.5g 組織，加入 1ml 試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃， 離心 30min，取上清液，轉(zhuǎn)移到超速離心管中。

2、粗制微粒體： 100 000g 4℃，離心 60min，棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟 2 的沉淀中加 1ml 試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g 離心 30min，棄 上清液。

4、最終微粒體：向步驟 3 的沉淀中加試劑二 0.5ml，蓋緊后充分震蕩溶解，即粗酶液，待測。