來(lái)源:最初是從林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)中提取得到,屬于一種枯草桿菌蛋白酶類的高活性絲氨酸蛋白酶。
化學(xué)本質(zhì):本質(zhì)上是一種蛋白質(zhì),其氨基酸序列及空間結(jié)構(gòu)決定了它的獨(dú)特功能和性質(zhì)。
外觀與性狀:一般呈現(xiàn)為白色或類白色的凍干粉末狀,這種粉末形態(tài)方便儲(chǔ)存、運(yùn)輸以及后續(xù)在不同應(yīng)用場(chǎng)景中進(jìn)行精確的稱量、溶解等操作,不過(guò)需要注意防潮,避免因吸濕而影響酶的活性。
溶解性:在水和一些緩沖溶液(如 Tris-HCl 緩沖液等)中有良好的溶解性,溶解后可形成均勻的溶液,便于參與各類生化反應(yīng)。而且其溶解性使其能夠更好地與底物接觸,發(fā)揮水解蛋白質(zhì)的作用。
穩(wěn)定性:具有較好的熱穩(wěn)定性,在一定溫度范圍內(nèi)(通常在 50℃ - 60℃之間,不同緩沖體系等條件下會(huì)有一定差異)能保持較高的活性,這使得它在一些需要加熱處理的實(shí)驗(yàn)操作(如在核酸提取過(guò)程中的特定步驟等)中可以正常發(fā)揮作用;同時(shí),在較寬的 pH 范圍(一般 pH 4 - 12 左右)內(nèi)也相對(duì)穩(wěn)定,不過(guò)最適 pH 通常在 7.5 - 8.5 之間,在此 pH 條件下酶的活性最高,發(fā)揮水解作用的效率最佳。
分子生物學(xué)領(lǐng)域:
核酸提取方面:是核酸提取過(guò)程中的常用試劑,在裂解細(xì)胞釋放核酸時(shí),它能夠迅速分解細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì),包括與核酸結(jié)合的組蛋白等,使得核酸可以更好地游離出來(lái),方便后續(xù)的分離、純化操作,有效提高核酸提取的產(chǎn)量和純度,廣泛應(yīng)用于基因組 DNA、總 RNA 等各類核酸的提取實(shí)驗(yàn),無(wú)論是從動(dòng)物組織、植物組織還是微生物樣本中提取核酸,都經(jīng)常會(huì)用到它。
去除蛋白質(zhì)雜質(zhì):在一些涉及蛋白質(zhì)和核酸混合體系的實(shí)驗(yàn)中,如構(gòu)建 DNA 文庫(kù)等,蛋白酶 K 可以用來(lái)去除樣本中多余的蛋白質(zhì)雜質(zhì),避免這些雜質(zhì)對(duì)后續(xù)的酶反應(yīng)(如 PCR 反應(yīng)等)造成干擾,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
生物技術(shù)與制藥行業(yè):
酶解工藝:在生產(chǎn)一些基于蛋白質(zhì)的藥物或生物制品時(shí),可利用蛋白酶 K 進(jìn)行酶解處理,將大分子蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為特定的肽段,這些肽段可能具有更好的生物活性、溶解性或穩(wěn)定性等,有助于研發(fā)新型的藥物劑型或者提高藥物的療效。
質(zhì)量控制:用于檢測(cè)藥物或生物制品中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的含量,通過(guò)蛋白酶 K 對(duì)樣品進(jìn)行處理后,分析剩余蛋白質(zhì)的情況,來(lái)評(píng)估產(chǎn)品的質(zhì)量和純度,確保符合相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
法醫(yī)鑒定領(lǐng)域:在處理一些法醫(yī)樣本(如血跡、毛發(fā)、組織等)時(shí),蛋白酶 K 有助于消化樣本中的蛋白質(zhì)成分,使得其中隱藏的 DNA 等遺傳物質(zhì)能夠更好地被提取和分析,為案件的偵破提供有力的遺傳證據(jù)。
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陳順