基礎(chǔ)介紹
蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。從林伯氏白色念球菌（tritirachiumalbumlimber）中純化得到。據(jù)資料顯示：該酶有兩個ca2+結(jié)合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理并無直接關(guān)系。然而，如果從該酶中除去ca2+，由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。
蛋白酶k作為一種蛋白酶可以起到消化和降解其他蛋白的作用，但同時其本身也是一種蛋白質(zhì)。和大部分的蛋白質(zhì)一樣，其活性和穩(wěn)定性也受到溫度、ph值、保存時間等因素的影響，因此，通常蛋白酶k凍干的干粉在0～4℃保存，或溶液狀態(tài)下于-20℃保存。而現(xiàn)有的蛋白酶k凍干工藝仍有不足，需要花費的時間太長，影響其蛋白酶k凍干產(chǎn)品的生產(chǎn)。為了解決蛋白酶k的運輸和應(yīng)用不便，縮短凍干的時間，加強蛋白酶k干粉的穩(wěn)定性、延長其保存期等問題，非常有必要需要一種新的凍干工藝流程。[1]
抑制劑
蛋白酶K是一種絲氨酸蛋白酶，因此可以用苯甲基磺酰氟抑制其作用，苯甲基磺酰氟是一種絲氨酸蛋白酶的抑制劑。
主要作用
蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會提高雜交信號。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片的脫落細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用解決上述出現(xiàn)的問題，并能達到理想的染色效果。[2]
保存方法
保存：保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，有效保證12月。
孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時；理想孵育時間為2小時。
主要應(yīng)用
蛋白酶K已廣泛應(yīng)用在皮革、毛皮、絲綢、醫(yī)藥、食品、 釀造等方面。皮革工業(yè)的脫毛和 軟化已大量利用蛋白酶，既節(jié)省時間，又改善勞動衛(wèi)生條件。蛋白酶還可用于 蠶絲脫膠、肉類嫩化、酒類澄清。臨床上可作藥用，如用胃蛋白酶治療消化不良，用酸性蛋白酶治療支氣管炎，用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶、 胰凝乳蛋白酶對外科化膿性創(chuàng)口的凈化及胸腔間漿膜粘連的治療。加酶洗衣粉是 洗滌劑中的新產(chǎn)品，含堿性蛋白酶，能去除衣物上的血漬和蛋白污物，但使用時注意不要接觸皮膚，以免損傷皮膚表面的蛋白質(zhì)，引起皮疹、濕疹等過敏現(xiàn)象。[3]
關(guān)鍵字： 蛋白酶K;39450-01-6;
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