Arenobufagin 是一種來自蟾蜍毒液的天然蟾二烯內(nèi)酯，通過抑制 PI3K/Akt/mTOR 通路誘導(dǎo)人肝細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡和自噬。

肝細(xì)胞癌 （HCC） 是一種致命的癌癥，迄今為止沒有有效的化療。目前，只有索拉非尼（一種多靶點酪氨酸激酶抑制劑）略微提高了 HCC 患者的生存率。
方法和結(jié)果：
在中醫(yī)中經(jīng)常用于治療肝癌的蟾蜍毒液中尋找天然抗 HCC 成分時，我們發(fā)現(xiàn) Arenobufagin 是一種來自蟾蜍毒液的蟾蜍內(nèi)酯，對 HCC HepG2 細(xì)胞以及相應(yīng)的多重耐藥 HepG2/ADM 細(xì)胞具有有效的抗腫瘤活性。我們發(fā)現(xiàn) Arenobufagin 誘導(dǎo) HCC 細(xì)胞線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，線粒體電位降低，Bax/Bcl-2 表達(dá)比增加，Bax 從胞質(zhì)溶膠易位到線粒體。Arenobufagin 還誘導(dǎo) HepG2/ADM 細(xì)胞自噬。自噬特異性抑制劑（3-甲基腺嘌呤、氯喹和巴弗洛霉素 A1）或 Beclin1 和 Atg 5 小干擾 RNA （siRNA） 增強(qiáng)了 Arenobufagin 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，表明 Arenobufagin 介導(dǎo)的自噬可以保護(hù) HepG2/ADM 細(xì)胞免于凋亡細(xì)胞死亡。此外，我們觀察到 Arenobufagin 對磷脂酰肌醇 3-激酶 （PI3K） /Akt/哺乳動物雷帕霉素靶標(biāo) （mTOR） 通路的抑制作用。有趣的是，雷帕霉素或 siRNA 雙鏈體對 mTOR 的抑制增強(qiáng)了 Arenobufagin 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和自噬。最后，Arenobufagin 抑制 HepG2/ADM 異種移植腫瘤的生長，這與聚 （ADP-核糖） 聚合酶切割、輕鏈 3-II 激活和 mTOR 抑制有關(guān)。
結(jié)論：
總之，我們首先在體外和體內(nèi)證明了 Arenobufagin 對 HCC 細(xì)胞的抗腫瘤作用。我們闡明了 Arenobufagin 的潛在抗腫瘤機(jī)制，這些機(jī)制涉及通過抑制 PI3K/Akt/mTOR 通路實現(xiàn)細(xì)胞凋亡和自噬之間的串?dāng)_。本研究可能為未來使用 Arenobufagin 作為 HCC 化療藥物的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

超快液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法定量測定大鼠血漿中 arenobufagin 及其在藥代動力學(xué)研究中的應(yīng)用。

建立了一種快速、靈敏、選擇性的超快液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定量測定大鼠血漿中 Arenobufagin 的方法。
方法和結(jié)果：
樣品預(yù)處理包括使用 0.1 mL 大鼠血漿用甲醇進(jìn)行一步蛋白沉淀。分離在 Shim-pack XR-ODS II（75 mm×2.0 mm，內(nèi)徑 2.1 μm）色譜柱上進(jìn)行，梯度洗脫流速為 0.30 mLmin（-1）。流動相為乙腈和0.1%甲酸的水溶液。使用柱后切換閥以減少基質(zhì)效應(yīng)。電噴霧電離后，在三重四聯(lián)串聯(lián)質(zhì)譜儀上以多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行檢測。在 1.056-1056 ngmL（-1） 的濃度范圍內(nèi)獲得 Arenobufagin 的線性校準(zhǔn)曲線，定量下限為 1.056ngmL（-1）。在所有質(zhì)量控制水平下，日內(nèi)和日間精密度值均低于 15%，準(zhǔn)確度范圍為 5.4% 至 9.8%。
結(jié)論：
該方法成功應(yīng)用于大鼠腹腔給藥后血漿中 Arenobufagin 的測定和藥代動力學(xué)研究。

arenobufagin 在體外和體內(nèi)的抗血管生成作用

本研究旨在探討 Arenobufagin 在體外和體內(nèi)的抗血管生成作用。
方法和結(jié)果：
通過 MTT 法測定 Arenobufagin 對 CNE-2 、 Hep2 、 SH-SY5Y 、 LOVO 、 PC-3 和 DU145 細(xì)胞以及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 （HUVECs） 的抗增殖作用。通過顯微鏡觀察 Arenobufagin 處理后 LOVO 和 HUVECs 的細(xì)胞形態(tài)變化。Arenobufagin 以劑量依賴性方式抑制 CNE-2 、 Hep2 、 SH-SY5Y 、 LOVO 、 PC-3 、 DU145 和 HUVECs 的增殖。此外，明顯觀察到人癌細(xì)胞中 Arenobufagin 的亞細(xì)胞毒性濃度誘導(dǎo) HUVECs 活力的顯著降低。采用雞胚絨毛膜尿囊膜 （CAM） 模型檢測 Arenobufagin 體內(nèi)抗血管生成作用。Arenobufagin 顯著抑制 CAM 的血管生成。細(xì)胞周期分析顯示，G2/M 期停滯，隨著 Arenobufagin 濃度的增加，出現(xiàn) sub-G1 峰。PI/Annexin V 雙染色測定進(jìn)一步證明 Arenobufagin 可以以劑量和時間依賴性方式誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Arenobufagin 處理后，流式細(xì)胞術(shù)分析檢測到的線粒體電位塌陷增加。它還觀察到 PARP 被 Western blotting 裂解為 p85 活性形式。
結(jié)論：
綜上所述，Arenobufagin 在體外和體內(nèi)均具有顯著的抗血管生成作用，其抗血管生成的作用機(jī)制可能與細(xì)胞周期停滯和靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡有關(guān)。