品名：Smart-ChIP? ChIP Kit，貨號(hào)：ChIP-1001， 品牌：Engibody
NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校課題組青睞并長(zhǎng)期采購(gòu)的ChIP試劑盒！
Smart-ChIP? ChIP保姆級(jí)試劑盒（磁珠法）的五個(gè)巨大優(yōu)勢(shì)
1、本試劑盒適用于貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、動(dòng)物組織及植物組織，均有針對(duì)性的詳細(xì)步驟可以處理這些樣本類型，是個(gè)真正的多合一Kit。
2、本試劑盒包含需要交聯(lián)處理的轉(zhuǎn)錄因子類Cross-linked ChIP（超聲法，蛋白-DNA弱結(jié)合）的全部試劑。
3、本試劑盒還包含無(wú)需交聯(lián)處理的組蛋白修飾類Native ChIP（MNase酶切法，蛋白-DNA強(qiáng)結(jié)合）的全部試劑。
4、本試劑盒包含了三大ChIP下游實(shí)驗(yàn)（PCR、qPCR以及NGS二代測(cè)序）的完整實(shí)驗(yàn)操作方案和數(shù)據(jù)分析方案，同時(shí)本ChIP Kit中還包含了熒光定量PCR全部試劑。
5、本說(shuō)明書(shū)是一本ChIP實(shí)驗(yàn)的全面技術(shù)手冊(cè)，透徹分析了ChIP實(shí)驗(yàn)中的重點(diǎn)、難點(diǎn)，對(duì)各種重點(diǎn)難點(diǎn)問(wèn)題都有針對(duì)性的解決方案。同時(shí)包含了表觀遺傳學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)和基本脈絡(luò)，匯總了各種組蛋白修飾類型的詳細(xì)信息?？赐赀@本保姆級(jí)說(shuō)明書(shū)，所有疑難都會(huì)迎刃而解，ChIP盡在掌握之中。
保姆級(jí)ChIP試劑盒
一盒在手，ChIP無(wú)憂！
第一部分：背景簡(jiǎn)介及應(yīng)用場(chǎng)景
染色質(zhì)免疫沉淀 (ChIP) 技術(shù)方法是一種用于在細(xì)胞天然染色質(zhì)背景下探測(cè)蛋白質(zhì)-DNA 相互作用的強(qiáng)大技術(shù)。這種方法可以用于檢測(cè)特定轉(zhuǎn)錄因子與基因組某個(gè)啟動(dòng)子元件的結(jié)合水平，也可以用于檢測(cè)整個(gè)基因組范圍內(nèi)位點(diǎn)上某種特定組蛋白修飾水平。染色質(zhì)免疫沉淀是理解染色體的一種革命性工具，使研究者可以了解染色質(zhì)及其相結(jié)合的調(diào)控因子之間的時(shí)空動(dòng)態(tài)相互作用。
除了組蛋白和轉(zhuǎn)錄因子以外，ChIP 技術(shù)還可用于分析轉(zhuǎn)錄輔助因子、DNA 復(fù)制因子及 DNA 修復(fù)蛋白與DNA特定區(qū)域的結(jié)合情況。進(jìn)行 ChIP 實(shí)驗(yàn)時(shí)，在得到特異性富集的genomic目的DNA片段后，可以在下游銜接標(biāo)準(zhǔn) PCR實(shí)驗(yàn)、定量實(shí)時(shí) PCR實(shí)驗(yàn)或者NGS二代測(cè)序。其中ChIP-qPCR和 ChIP-sequence功能尤為強(qiáng)大，最為常用。
1、ChIP和EMSA、DNA Pull-down、DAP-seq，這四種研究DNA-蛋白互作技術(shù)的內(nèi)在關(guān)系是什么？
EMSA———電泳凝膠遷移阻滯實(shí)驗(yàn)(Electrophoretic Mobility Shift Assay)，In Vitro體外通過(guò)DNA探針檢測(cè)目的蛋白，反向驗(yàn)證了ChIP。是經(jīng)典方法。
DNA Pull-down———In Vitro體外通過(guò)DNA探針捕獲目的蛋白或其他候選蛋白，獲取蛋白后進(jìn)行WB檢測(cè)或MS質(zhì)譜鑒定。也是經(jīng)典方法。
DAP-seq———DNA親和純化測(cè)序，使用表達(dá)純化得到的重組靶蛋白（例如重組轉(zhuǎn)錄因子）捕獲樣本中與之相結(jié)合的所有g(shù)enomic DNA片段，本質(zhì)上可以理解為In Vitro體外 ChIP，適用于沒(méi)有合適ChIP抗體的情況，同時(shí)這種技術(shù)的另一個(gè)獨(dú)特優(yōu)勢(shì)是可以在全基因組范圍內(nèi)Genome wide快速篩選得到可能和靶蛋白相結(jié)合的全部基因組DNA片段。這是近年來(lái)的新興技術(shù)。
2、ChIP和CUT&RUN、CUT&Tag，這三種DNA-蛋白互作技術(shù)之間的比較
CUT&RUN、 CUT&Tag都是研究DNA和蛋白互作的新技術(shù)，是2017年由美國(guó)弗雷德癌癥中心的Henikoff教授開(kāi)發(fā)的新技術(shù)，受到廣泛關(guān)注，這個(gè)技術(shù)是ChIP技術(shù)的強(qiáng)大補(bǔ)充，適用于低細(xì)胞用量的實(shí)驗(yàn)，只需要100個(gè)-10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的樣本即可實(shí)施實(shí)驗(yàn)，而ChIP需要百萬(wàn)級(jí)細(xì)胞才能實(shí)施。所以CUT&RUN、 CUT&Tag對(duì)于難以獲得足夠細(xì)胞樣本的實(shí)驗(yàn)者來(lái)說(shuō)是個(gè)好消息，但是這兩種新技術(shù)雖然原理巧妙，但操作步驟較為復(fù)雜，試劑盒較貴，而且因?yàn)槭侨涛⒘坎僮鳎枰碇貌簧賹ｉT(mén)的儀器設(shè)備（Qseq 100或安捷倫bioanalyzer 2100等）。對(duì)于不難獲得樣本細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)者而言，傳統(tǒng)經(jīng)典ChIP技術(shù)仍然有其不可替代的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，操作較為簡(jiǎn)單，步驟成熟，無(wú)需額外添置昂貴的專門(mén)儀器，實(shí)驗(yàn)成本大大降低。
3、ChIP-seq和RNA-seq的聯(lián)合分析
這是經(jīng)典研究策略，讓ChIP-seq的轉(zhuǎn)錄調(diào)控環(huán)節(jié)與最終細(xì)胞內(nèi)mRNA實(shí)際水平進(jìn)行比較，互相印證。
第二部分：技術(shù)原理和技術(shù)流程
技術(shù)原理：
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChIP）的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下把細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和DNA交聯(lián)，超聲波或酶切將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后用所研究的目的蛋白質(zhì)抗體免疫沉淀蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體，從而特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，以便用于下游的PCR分析和Sequence測(cè)序。
ChIP-qPCR用于檢測(cè)通過(guò)蛋白特異性免疫沉淀富集得到的特定 DNA 序列的相對(duì)數(shù)量。ChIP-sequence能對(duì)蛋白-DNA 相互作用和組蛋白修飾進(jìn)行全基因組范圍內(nèi)的分析。
兩大技術(shù)路線：
因?yàn)椋?/strong>甲醛交聯(lián)后的染色質(zhì)對(duì)限制性內(nèi)切酶、MNase及DNase I高度抵抗，不易被酶切斷。通常需要使用超聲波來(lái)物理打斷染色質(zhì)。
所以：根據(jù)實(shí)驗(yàn)者研究的目的蛋白不同，采用2種不同的技術(shù)路線
1、如果研究的是轉(zhuǎn)錄因子，轉(zhuǎn)錄因子和啟動(dòng)子DNA元件的結(jié)合一般都是弱結(jié)合，是容易解離的，且轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞內(nèi)的豐度較低，所以一般采用甲醛固定交聯(lián)轉(zhuǎn)錄因子和DNA，超聲打斷得到染色質(zhì)小片段的技術(shù)流程。
2、如果研究的是組蛋白甲基化或乙酰化修飾，細(xì)胞內(nèi)豐度較高，且DNA纏繞在組蛋白上，是相對(duì)強(qiáng)結(jié)合，不易解離，因此一般無(wú)需甲醛固定交聯(lián)，MNase (Micrococcal Nuclease) 酶切即可得到染色質(zhì)小片段。
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第三部分：ChIP試劑盒組分清單
（共計(jì)19個(gè)組分，均可單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)）
| 編號(hào) | 組分名稱 | 數(shù)量 | 保存 | 注意事項(xiàng) |
| 下列組分收到后需儲(chǔ)存在 4 °C中，磁珠千萬(wàn)不要冷凍。 |
| IF0002 | ChIP級(jí)Protein A/G 磁珠
(單鏈鮭魚(yú)精DNA預(yù)包被) | 1 mL*2 | +4 °C | 不能冷凍 |
| ChIP-001 | 10×交聯(lián)終止劑 | 48 mL | +4 °C |
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| ChIP-002 | Chromatin Extract Buffer | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-005 | ChIP Wash Buffer 1 | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-006 | ChIP Wash Buffer 2 | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-007 | ChIP Wash Buffer 3 | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-008 | ChIP Wash Buffer 4 | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-009 | ChIP Elution Buffer | 7.2 mL | +4 °C | 如有絮狀物，使用前需要置室溫恢復(fù)溶解 |
| ChIP-011 | TCEP | 572 mg | +4 °C | 使用前配制，工作終濃度為50 mM |
| 下列組分收到后必須要儲(chǔ)存在 -20 °C中 |
| ChIP-017 | MNase 微球菌核酸酶 | 30 μL | -20 °C |
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| ChIP-003 | 1×Cleavage Buffer | 3 mL | -20 °C |
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| ChIP-004 | 0.5M酶切終止劑 | 1.5 mL | -20 °C |
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| ChIP-018 | RNase A (10 mg/mL) | 100 μL | -20 °C | 使用時(shí)需要加入鈉鹽 |
| ChIP-019 | Proteinase K (20 mg/mL) | 100 μL | -20 °C |
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| ChIP-012 | DNA沉淀增強(qiáng)物 | 100 μL | -20 °C |
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| ChIP-010 | ChIP專用鹽溶液 | 1.5 mL | -20 °C |
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| ChIP-020 | 2×熱啟動(dòng)熒光定量PCR Master Mix套裝（含有ROX I,ROX II各100μL） | 1.25 mL*2 | -20 °C |
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| ChIP-021 | ChIP級(jí)Normal Mouse IgG
陰性對(duì)照 | 200 μL | -20 °C |
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| ChIP-022 | ChIP級(jí)Normal Rabbit IgG
陰性對(duì)照 | 200 μL | -20 °C |
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：
1、ChIP-PCR
2、ChIP-qPCR
3、ChIP-測(cè)序
Smart-ChIP? ChIP kit 保姆級(jí)ChIP試劑盒官網(wǎng)詳細(xì)頁(yè)面：
https://www.engibody.com/products/Smart-ChIP-ChIP-Kit.html
注意：本試劑盒僅用于科學(xué)研究，不用于臨床診斷。
訂購(gòu)請(qǐng)咨詢：13817407320(微信同號(hào))
關(guān)鍵字： 染色質(zhì)免疫沉淀;ChIP;轉(zhuǎn)錄因子;組蛋白修飾;染色質(zhì);
復(fù)名表觀遺傳學(xué)（上海復(fù)名醫(yī)療科技有限公司），專注于表觀遺傳學(xué)研究工具的開(kāi)發(fā)和表觀技術(shù)服務(wù)的提供。
經(jīng)過(guò)多年和全球著名大學(xué)表觀研究領(lǐng)域?qū)＜医淌诘慕涣骱吞接懀e累經(jīng)驗(yàn)，精準(zhǔn)解決表觀研究工具領(lǐng)域的痛點(diǎn)難點(diǎn)，在表觀基因組學(xué)、表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)和表觀蛋白組學(xué)領(lǐng)域均開(kāi)發(fā)了一系列研究試劑盒并提供表觀技術(shù)服務(wù)，和哈佛大學(xué)，華盛頓大學(xué)，斯坦福大學(xué)，麻省理工學(xué)院，UCSC，UCSF，HHMI，德國(guó)海德堡大學(xué)，法國(guó)國(guó)家健康與醫(yī)學(xué)研究院inserm等世界名校均建立了密切的合作和交流，所開(kāi)發(fā)的抗體，試劑，試劑盒受到了全球客戶的歡迎。
Engibody為復(fù)名表觀遺傳學(xué)旗下品牌，所開(kāi)發(fā)的抗體，試劑，表觀試劑盒在全球范圍內(nèi)銷售，受到眾多世界著名大學(xué)課題組老師及醫(yī)藥500強(qiáng)巨頭的認(rèn)可和喜愛(ài)。
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