堿性木聚糖酶（Basic Xylanase，BAX）測定試劑盒說明書
分光光度法50管/24樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
堿性木聚糖酶（Basic Xylanase，BAX）測定試劑盒測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)中，BAX一般分離自最適生長pH為9 -11的微生物。
測定原理：
BAX在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算BAX活力。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體65mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。（若出現白色絮狀或顆粒狀沉淀，可60℃加熱溶解后使用）。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶提取：
1. 發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000g，4℃，離心15min，取上清，作為待測樣品。
2. 酶干粉：稱約0.1mg，加1mL緩沖液溶解待測。
3. 組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL緩沖液）進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心10min，取上清待測。
堿性木聚糖酶（Basic Xylanase，BAX）測定試劑盒測定操作表：
| 對照管 | 測定管 |
樣品（μL） | 200 | 200 |
緩沖液（μL） | 300 | 300 |
試劑一（μL） |
| 200 |
試劑二（μL） | 300 |
|
混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應30min，立即沸水浴10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應體系) |
試劑一（μL） | 200 |
|
試劑二（μL） |
| 300 |
混勻，沸水浴顯色5min(注意不要讓蓋子爆開，以免進水改變了反應體系)，1mL玻璃比色皿，540nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 |
BAX計算公式：
標準曲線：y = 2.8432x - 0.0293，R2 = 0.9985
1. 按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力（nmol/min/mL）= （ΔA+0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×106
= 391× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×106÷W
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數=V反總÷V樣=1000μL÷200μL=5；
106：轉化因子，即1mg/mL=106ng/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
注意事項：
1. 吸光度變化應該控制在0.01~0.8之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變；也可以延長或者縮短反應時間。
2. 試劑盒2-8℃保存，保質期3個月，建議盡快使用。
關鍵字： 堿性木聚糖酶（Basic Xylanas;堿性木聚糖酶（Basic Xylanas;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學領域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術服務的生物企業(yè)。包括分子生物學、免疫學、微生物學、細胞學等 。旗下擁有 “雅吉生物”、“晶風生物”、“彩佑實業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質、服務、信譽”的精神，堅持以優(yōu)良的技術、優(yōu)質的產品、良好的信譽為國內外廣大用戶提供優(yōu)質生物產品和服務。
公司在重視產品質量的同時，也建立了一套集技術支持，物流售后服務等多部門聯動服務體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務提供給每一個客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內眾多重點實驗室廣泛使用，深受廣大科研人員好評，先后在權威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質量保證、供貨及時、服務周到。