N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG）試劑盒說明書
分光光度法50管/24樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
乙酰輔N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG）試劑盒酶A（Acetyl-CoA）含量測定試劑盒測定意義：
NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶，廣泛存在于各種組織、體液和細胞中，以前列腺和腎近曲小管細胞內(nèi)含量最高。NAG活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
測定原理：
NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。
自備用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體50mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
乙酰輔N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG）試劑盒酶A（Acetyl-CoA）含量測定試劑盒測定步驟：
1、 分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定（在EP管中依次加入下列試劑）：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 200 |
|
蒸餾水 |
| 200 |
試劑二 | 250 | 250 |
樣本 | 50 | 50 |
迅速混勻，放入37℃準確水浴30min
充分混勻，400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
NAG活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00543x +0.0083；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
2、血清（漿）NAG活力的計算
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V反總]÷V樣÷T =61.39×(ΔA-0.0083)
3、細胞、細菌和組織中NAG活力的計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=61.39×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=61.39×(ΔA-0.0083)÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.123×(ΔA-0.0083)
V反總：反應體系總體積，0.5mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；T：反應時間，30min。
關(guān)鍵字： 乙酰輔N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-;乙酰輔N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-;
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