檸檬酸（citric acid, CA）含量測定試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
CA是生物體內(nèi)常見的有機(jī)酸，是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)。此外，CA是三羧酸循環(huán)步反應(yīng)的產(chǎn)物。
檸檬酸（citric acid, CA）含量測定試劑盒測定原理：
酸性條件下，檸檬酸還原Cr6+生成Cr3+，在545nm處有特征吸收峰；通過測定545nm吸光值的增加，即可計(jì)算出樣品中檸檬酸含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1支，－20℃保存。
試劑四：粉劑×1瓶，室溫保存。臨用前配制，加入5mL試劑一，充分溶解。
試劑五：液體×1瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，250μmol/L檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
樣品處理：
1. 液體樣品：取0.1mL液體加試劑一0.9mL，充分混勻，11000g， 4℃離心10min，取上清液待測。
2. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。11000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
3. 線粒體：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，600g/min，4℃離心5min；取上清至另一EP管中，11000g，4℃離心10min，棄上清（此上清液可用于細(xì)胞質(zhì)CA含量測定）；向沉淀中加試劑二200μl，以及試劑三2μl，充分懸浮溶解，11000g，4℃離心10min，取上清液待測。
4. 細(xì)菌、真菌中：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；11000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
檸檬酸（citric acid, CA）含量測定試劑盒測定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到545 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一置于30℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 空白管：取EP管，依次加入100μL蒸餾水，700μL試劑一，100μL試劑四，100μL試劑五，混勻后室溫靜置30min，于545nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，依次加入100μL標(biāo)準(zhǔn)液，700μL試劑一，100μL試劑四，100μL試劑五，混勻后室溫靜置30min，于545nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 測定管：取EP管，依次加入100μL上清液，700μL試劑一，100μL試劑四，100μL試劑五，充分混勻后室溫靜置30min，于545nm測定吸光度，記為A測定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
計(jì)算公式：
1. 按液體樣品的體積計(jì)算
檸檬酸含量（nmol/L）= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V總
= 2500×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)液：250μmol/L=0.25 m mol/L；樣品稀釋倍數(shù)：（0.1 mL樣品+0.9mL試劑一）÷ 0.1 mL樣品=10；V總：1mL。
2. 按組織質(zhì)量計(jì)算
檸檬酸含量（nmol/g 鮮重）= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷W
= 250×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：250 μ mol/L；V總：上清液總體積，1.0 mL=0.001 L；W：樣品質(zhì)量，g。
3. 按蛋白含量計(jì)算
檸檬酸含量（nmol/mg prot）= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]÷Cpr
= 250×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷Cpr
C標(biāo)準(zhǔn)液：250 μ mol/L=0.25μ mol/mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)含量，mg/mL。
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
檸檬酸含量（nmol/104 cell）= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷細(xì)胞數(shù)量
= 250×(A測定管－A空白管) ÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
C標(biāo)準(zhǔn)液：250 μ mol/L；V總：上清液總體積，1.0 mL=0.001 L；
注意事項(xiàng)：
1. 樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行。
2. 試劑四需現(xiàn)配現(xiàn)用，配置好的一周內(nèi)使用完；
3. 試劑五為易致癌物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過程中，需佩戴手套，避免試劑五濺到皮膚上。
4. 檸檬酸提取液不能用于蛋白含量測定，如需測定蛋白含量，需另取組織，使用本公司BCA試劑盒進(jìn)行測定。
關(guān)鍵字： 檸檬酸（citric acid, CA）;檸檬酸（citric acid, CA）;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員好評(píng)，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。