考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定試劑盒說明書
分光光度法 50管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定試劑盒測(cè)定原理：
在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物；該復(fù)合物在620nm處有吸收峰， 其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質(zhì)分析。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、分光光度計(jì)、石英比色皿、移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體30 mL×1瓶，4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提?。?/span>
1. 液體樣品：澄清液體樣品可以直接測(cè)定。
2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：20的比例（建議稱取約0.05 g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））
冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測(cè)液。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋）
3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定試劑盒測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，蒸餾水調(diào)零。
2. 在石英比色皿中加入：
試劑（μL） | 測(cè)定管 | 空白管 |
樣本 | 500 |
|
蒸餾水 |
| 500 |
試劑一 | 500 | 500 |
混勻后，測(cè)定波長(zhǎng)620 nm吸光值，△A=A測(cè)定-A空白。 |
注意：空白管只需要測(cè)定一次。
計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 14.253x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL)
y: 吸光值差值
1.按液體樣本體積計(jì)算：
Cpr（mg/mL）=(△A+0.0007)÷14.253
=0.07×(△A+0.0007)
2.按組織樣本質(zhì)量計(jì)算：
Cpr（mg/g）=(△A+0.0007)÷14.253×V總÷W
=0.07×(△A+0.0007)÷W
V總：提取液體積，1 mL; W：樣本質(zhì)量，g。
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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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