2XLAMP MagicMix(原通用型LAMP試劑盒）是基于熒光探針檢測(cè)的即用型PCR 試劑盒，可以對(duì)靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩(wěn)定劑、dNTPs、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有實(shí)時(shí)定量PCR 所需要的成分，用戶只需加入基因組DNA 或cDNA 模板、引物和探針即可進(jìn)行探針法實(shí)時(shí)定量PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 以2×Mix 提供，用戶只需準(zhǔn)備模板、引物、探針和ROX 染料（取決于qPCR 儀器）即可以進(jìn)行探針法實(shí)時(shí)定量PCR 實(shí)驗(yàn)，非常方便快捷，降低了操作誤差。
2. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。靈敏度時(shí)可以達(dá)到50 拷貝/反應(yīng)（跟模板質(zhì)量，引物設(shè)計(jì)等相關(guān)）。
3. 既可用于 TaqMan 探針 qPCR，也可以是分子信標(biāo)（molecular beacon）探針 qPCR。
4. 靈敏度和專一性比染料法熒光定量PCR 更高。
5. 可用于基因表達(dá)分析、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實(shí)驗(yàn)。也可以用于定性檢測(cè)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，1mL 足夠 100 次 20uL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng)。
自備陽性對(duì)照模板（6 各梯度）
不加
各 1 uL（各
加 1 個(gè)梯度）
陰性對(duì)照模板（一般用水）
1 uL
自備探針（0.5uM）
各 1 uL
自備 50×自備 ROX I 或 ROX II
染料（見注）
各 0.4 uL
0.4 uL
補(bǔ)超純水到
20 uL
注，下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊(cè)為準(zhǔn)。
1、不需要 ROX 的機(jī)型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、，、 Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號(hào)的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會(huì)影響整個(gè) PCR 分析。
2、需要使用 ROX I 的機(jī)型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、 Step One Plus。
3、需要使用 ROX II 的機(jī)型：ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、 Corbett RotorGene 3000。
2. 放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增, 下表的擴(kuò)增參數(shù)僅供參考，一定需要根據(jù)靶分子長(zhǎng)度，引物和探針的 Tm 值、標(biāo)記染料的種類等進(jìn)行調(diào)節(jié)。一般選擇三步法 PCR：
如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以選擇兩步法 PCR：
3. 數(shù)據(jù)處理
如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
如果把2XLAMP MagicMix(原通用型LAMP試劑盒）用于定性檢測(cè)，只判斷陽性或陰性。一般情況下，陰性對(duì)照 Ct 大于或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小
于 40，則為陽性。
染料法 qPCR MagicMix
上海雅吉生物科技有限公司
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