一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

細(xì)胞別稱：3T3-L1; 3T3L1; 3T3L1; 3T3-L1 ad; NIH-3T3-L1; NIH3T3-L1

細(xì)胞貨號：SNL-022

細(xì)胞種屬：小鼠

生長情況：貼壁

培養(yǎng)條件：H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）

傳代方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s，吸走潤洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；

6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8.補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng)：不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間

消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

三、細(xì)胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);

凍存規(guī)格：200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法：

1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；

2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；

3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

注意事項(xiàng) 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

Tips：

1.細(xì)胞貼壁較弱，消化時間偏短，注意控制消化時間；

2.注意控制細(xì)胞密度，過高或者過低都可能影響細(xì)胞狀態(tài)，不要長時間高密度培養(yǎng)；

我們推薦使用尚恩生物3T3-L1（小鼠胚胎成纖維細(xì)胞）專用完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：SNLM-022）作為體外培養(yǎng)3T3-L1（小鼠胚胎成纖維細(xì)胞）的培養(yǎng)基。