microRNA 提取試劑盒

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。

microRNA 提取試劑盒是一款專門用于提取 miRNA 等小 RNA（5 s RNA）的系統(tǒng)，可以快速的從細(xì)胞和組織中提取高純度的 microRNA，同時(shí)去除 28 s 和 18 s RNA，用于反轉(zhuǎn)錄、測(cè)序等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。

本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸與保存，有效期 12 個(gè)月。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。

1. 本試劑盒提取的 microRNA 純度高，幾乎不含 28 s 和 18 s RNA。

2. 本試劑盒無(wú)需酚/ 氯仿抽提，及氯化鋰或異丙醇沉淀，顯著提高實(shí)驗(yàn)操作的安全性。

四、自備試劑與耗材。

無(wú)水乙醇，70%乙醇，無(wú) RNA 酶的 EP 管（1.5 mL）和槍尖。

五、使用說(shuō)明。

1. 試劑配制：

a) Wash Buffer C（去蛋白液）配制。在 Wash Buffer C 試劑中加入 21 mL 無(wú)水乙醇，混勻。

b) Wash Buffer D（漂洗液）配制。在 Wash Buffer D 試劑中加入 24 mL 無(wú)水乙醇，混勻。

2. 細(xì)胞和組織裂解。

1) 細(xì)胞裂解。

a) 貼壁細(xì)胞裂解。胰酶消化法收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)，按照細(xì)胞數(shù)量添加一定體積的裂解液?；蚋鶕?jù)細(xì)胞培養(yǎng)皿大小，直接加入裂解液，利用移液器吹打，混勻，轉(zhuǎn)移到 EP 管中，室溫裂解 2 min。

b) 懸浮細(xì)胞裂解。離心收集懸浮細(xì)胞并計(jì)數(shù)，按照細(xì)胞數(shù)目添加一定體積的裂解液，混勻，室溫裂解 3 min。

2) 動(dòng)物組織裂解。將組織塊加入裂解液中，利用手持式勻漿器破碎組織，室溫裂解 3 min，再12,000×g，4 ℃離心 3 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管，即為組織裂解液。

3. 細(xì)胞或組織裂解液中加入等體積的 70%乙醇，混勻，轉(zhuǎn)入 RNA 純化柱。

4. 12,000×g，4 ℃離心 30 sec，棄純化柱（柱上吸附了 28 s 和 18 s RNA，若需要這兩種類型的 RNA，則洗滌純化柱，用 Elution Buffer R 洗脫即可），收集濾液（含有 microRNA）。

5. 向?yàn)V液中加入 450 μL 無(wú)水乙醇，混勻。

6. 取 600 μL 混合液加入新的 RNA 純化柱中，12,000×g，4 ℃離心 30 sec，棄濾液。

7. 將剩余的混合液加入對(duì)應(yīng)的 RNA 純化柱中，12,000×g，4 ℃離心 30 sec，棄濾液。

8. 向 RNA 純化柱中加入 500 μL Wash Buffer C（去蛋白液），12,000×g，4 ℃離心 30 sec，棄濾液。

9. 向 RNA 純化柱中加入 500 μL Wash Buffer D（漂洗液），12,000×g，4 ℃離心 2 min，棄濾液。

10. 將 RNA 純化柱插入新的 RNase-free EP 管中，向柱中央滴加 100 μL Elution Buffer R（洗脫液）或 RNase-free ddH2O，室溫靜置 2 min。

11. 12,000×g，4 ℃離心 2 min，得到 microRNA 溶液。

12. 立即用于反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，或保存于-80 ℃冰箱。

六、注意事項(xiàng)。

1. 本產(chǎn)品提取的 RNA 中，只含有小 RNA (5 s RNA)，幾乎不含 28 s 和 18 s 的 RNA。

2. 請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服、佩戴乳膠手套和安全眼鏡，避免試劑飛濺導(dǎo)致的皮膚、眼睛等部位的化學(xué)灼傷。