RNA提取試劑
(TRIZOL型)
產(chǎn)品編號 | 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
Omn-01 | RNA提取試劑（TRIZOL型） | 100 mL | 4 ℃ |
RNA 溶解液 | 10 mL | RT |
說明書 | 1份 |
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一、運(yùn)輸與存儲條件
本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸，避光保存，有效期2年。
二、注意事項(xiàng)（請使用試劑盒前閱讀此注意事項(xiàng)）
1. 蛋白、多糖或脂類含量較高的組織，裂解后可能存在沉淀或油狀漂浮物，12,000×g，4 ℃離心10 min除去沉淀或其它雜物，上清轉(zhuǎn)入新的離心管，再加入氯仿，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. 轉(zhuǎn)移上層水相時若吸入中間層或下層液體，則導(dǎo)致DNA或蛋白污染，降低RNA純度。
3. 若細(xì)胞數(shù)量較少（少于1×105）或組織塊較小（小于10 mg）時，RNA總量較少，可以使用本公司的微量RNA提取試劑盒（磁珠型，Cat：Omn-12）來提取。
4. 檢測RNA吸光度時，260 nm、320 nm、230 nm和280 nm處吸光度值的分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白質(zhì)等物質(zhì)的吸光度值。OD260/OD280（R）體現(xiàn)了RNA的純度，質(zhì)量較好的RNA的R值應(yīng)該在1.8~2.2之間。當(dāng)R<1.8時，說明RNA溶液中的蛋白質(zhì)污染比較明顯。當(dāng)R>2.2時，說明RNA已經(jīng)被降解成了單核苷酸。
5. 利用瓊脂糖凝膠檢測RNA時，高質(zhì)量的總RNA具有以下特征：電泳條帶清晰，無拖尾、模糊現(xiàn)象；28 S亮度明顯大于18S，比值接近或超過2:1；5 S條帶亮度較弱或不可見。
6. 本試劑具有腐蝕性與刺激性，使用時請穿好實(shí)驗(yàn)服、佩戴乳膠手套和安全眼鏡，避免試劑飛濺導(dǎo)致的皮膚、眼睛或者呼吸道等部位的化學(xué)灼傷。如果不慎接觸皮膚或者眼睛，請立即用大量水沖洗，必要時去醫(yī)院護(hù)理。
三、產(chǎn)品簡介
RNA提取試劑（TRIZOL型）是一款基于TRIZOL配方和原理設(shè)計的RNA提取試劑，通過酚/氯仿抽提，可以高效的提取細(xì)胞、細(xì)菌、血液、動物組織和植物組織中的RNA，用于反轉(zhuǎn)錄和Northern blot等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
四、特點(diǎn)與優(yōu)勢
1. 適用于多種（細(xì)胞、細(xì)菌、血液、動物組織和植物組織等）類型生物樣品的RNA提取。
2. 可以快速獲得高純度的RNA。
五、自備試劑與耗材
氯仿（三氯甲烷），75%乙醇，RNase-free EP管（1.5 mL）和槍尖。
六、使用說明
1. 細(xì)胞或組織裂解。
1) 細(xì)胞裂解。
a) 貼壁細(xì)胞裂解。6孔板培養(yǎng)細(xì)胞，棄培養(yǎng)液，預(yù)冷的PBS洗滌一次，加入1 mL RNA提取試劑（TRIZOL型），吹打混勻，轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP管中，室溫靜置3-5 min。
b) 懸浮細(xì)胞裂解。離心收集懸浮細(xì)胞，按照5-10×106個細(xì)胞需要1 mL RNA提取試劑（TRIZOL）的比例加入試劑，混勻，室溫靜置3-5 min。
2) 組織裂解。稱取10-50 mg組織，置于EP管中，加入1 mL RNA提取試劑（TRIZOL型），利用手持式電動勻漿儀進(jìn)行勻漿處理，室溫靜置3-5 min。
2. 加入200 μL氯仿，劇烈震蕩（Vortex）15 sec。
3. 12,000 ×g，4 ℃，離心10 min，樣品分為三層，RNA集中在上層的無色水相中，DNA集中在中間層，而蛋白集中在下層的淡紫紅色液相中。
4. 轉(zhuǎn)移上層水相至新的EP管，加入等體積的異丙醇，顛倒混勻10-20次。
5. 12,000×g，4 ℃離心10 min，可以在管底或管壁上看到白色凝膠狀的RNA沉淀，棄上清液。
6. 加入1 mL 75%的乙醇，輕微震蕩15 sec，洗滌RNA沉淀。
7. 12,000×g，4 ℃離心5 min，RNA沉淀到管底，棄上清。
8. 瞬時高速離心，使管壁上的液體離心到管底，利用微量移液器吸盡液體。
9. 加入100-200 μL RNA溶解液或RNase-free ddH2O，溶解RNA。
10. 測定RNA濃度與純度，用于反轉(zhuǎn)錄或其它實(shí)驗(yàn)，或保存于-80℃冰箱。
七、常見問題與分析
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
RNA降解 | 樣品反復(fù)凍融或保存不當(dāng) | 盡量使用新鮮的組織或細(xì)胞樣品。樣品取出后盡快保存在-80 ℃，避免反復(fù)凍融。 |
耗材存在RNA酶污染。 | 選擇使用RNase-free的耗材，或?qū)⒑牟倪M(jìn)行RNase清除處理。 |
沒有在低溫環(huán)境下操作。 | 請在冰上或冰水混合物中提取RNA。 |
細(xì)胞消化過度。 | 收集細(xì)胞時縮短胰酶消化時間。 |
RNA溶解液含有RNase | 選擇使用RNase-free 的溶解液或ddH2O。 |
保存條件不當(dāng)。 | 提取的RNA盡快保存在-80 ℃，而不是-20 ℃。 |
RNA濃度低 | 樣品量過低。 | 增加樣品量。 |
裂解不充分。 | 充分混勻，室溫靜置5 min，或增加裂解液用量。 |
基因組DNA污染 | 樣品量過大。 | 按照說明書內(nèi)樣品量要求，減少樣品用量。 |
轉(zhuǎn)移上層水相時，吸入中間層白色沉淀。 | 減少吸取上層液相，不吸入中間層白色沉淀。
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關(guān)鍵字： RNA提取;TRIZOL;
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