TNF樣配體1A（TL1A）響應(yīng)型熒光素酶報告基因Jurkat細(xì)胞系是一種TL1A響應(yīng)型的DR3/NF-kB熒光素酶報告基因Jurkat細(xì)胞系，表達(dá)由NF-kB響應(yīng)元件控制的熒光素酶，并穩(wěn)定表達(dá)人類DR3（死亡受體3；TNFRSF25；NM_003790.3）。熒光素酶報告基因的表達(dá)由位于最小TATA啟動子上游的NF-kB響應(yīng)元件驅(qū)動?？梢酝ㄟ^測量熒光素酶活性來監(jiān)測DR3配體TL1A（TNF樣蛋白1A；TNFSF15）激活NF-kB信號通路的情況。該細(xì)胞系已驗證對TL1A和TNF-α刺激有響應(yīng)。TL1A刺激可被中和性抗TL1A抗體（#101729）和DcR3（誘餌受體3）阻斷。

背景

TNF樣配體1A（TL1A，也稱為血管內(nèi)皮生長抑制因子，VEGI或TNFSF15）是一種抗血管生成細(xì)胞因子。它是炎癥的重要介質(zhì)，通過與其受體DR3（死亡受體3）結(jié)合，激活下游信號，參與先天和適應(yīng)性免疫穩(wěn)態(tài)。許多研究表明，可以在T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎和炎癥性腸病患者的血清中檢測到可溶性TL1A。此外，最近的臨床研究表明，抗TL1A抗體治療是炎癥和自身免疫性疾病治療的有希望的方法。

艾美捷TL1A響應(yīng)型熒光素酶報告基因Jurkat細(xì)胞系（#BPS-78811）的應(yīng)用：

• 表征可溶性TL1A活性。

• 在基于細(xì)胞的檢測格式中篩選抗TL1A抗體。

細(xì)胞培養(yǎng)協(xié)議

注意：Jurkat細(xì)胞源自人類材料，因此建議采取適當(dāng)?shù)陌踩A(yù)防措施。

細(xì)胞解凍

1. 從液氮儲存中取出一個細(xì)胞瓶。在準(zhǔn)備解凍前保持在干冰上。

2. 準(zhǔn)備解凍時，在37°C水浴中大約60秒旋轉(zhuǎn)冷凍細(xì)胞瓶。一旦細(xì)胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到一個空的50毫升圓錐管中。

注意：在37°C水浴中放置細(xì)胞過久將導(dǎo)致活性迅速喪失。

3. 使用10毫升血清學(xué)移液管，緩慢向含有細(xì)胞的圓錐管中逐滴加入10毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基2，同時輕輕搖晃圓錐管以實現(xiàn)溫和混合，避免滲透沖擊。

4. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并將細(xì)胞在5毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基2中重懸。

5. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6. 在培養(yǎng)24小時后檢查細(xì)胞活性。對于T25瓶，加入3-4毫升解凍培養(yǎng)基2，并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好傳代。

7. 細(xì)胞應(yīng)在達(dá)到2 x 10^6細(xì)胞/毫升的密度之前傳代。在第一次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基2A。

細(xì)胞傳代

在細(xì)胞達(dá)到2 x 10^6細(xì)胞/毫升的密度之前，但在0.2 x 10^6細(xì)胞/毫升的密度以上時，將細(xì)胞懸浮液稀釋到新的培養(yǎng)容器中，使用生長培養(yǎng)基2A。所用的傳代比例應(yīng)保持細(xì)胞在0.2 x 10^6到2 x 10^6細(xì)胞/毫升之間。

細(xì)胞冷凍

1. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在4°C細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中將細(xì)胞團(tuán)重懸至約2 x 10^6細(xì)胞/毫升的密度。

2. 將1毫升細(xì)胞懸浮液分裝到每個冷凍瓶中。將瓶子放置在絕緣容器中緩慢冷卻，并在-80°C下儲存過夜。

3. 次日將瓶子轉(zhuǎn)移到液氮中長期儲存。

注意：建議擴(kuò)展細(xì)胞并至少冷凍10個早期傳代的瓶子以備將來使用。

驗證：

圖：親本NF-kB熒光素酶報告基因Jurkat細(xì)胞系（NF-κB Jurkat）和TL1A響應(yīng)型熒光素酶報告基因Jurkat細(xì)胞系（DR3/NF-kB Jurkat）中的DR3蛋白表達(dá)。細(xì)胞裂解后，通過SDS-PAGE電泳分析人類DR3表達(dá)水平，隨后使用DR3重組單克隆抗體（11H6L9）（ThermoFisher #702277）進(jìn)行Western Blotting。使用β-Actin（13E5）兔mAB（Cell Signaling #4970）作為裝載對照。

TL1A響應(yīng)型熒光素酶報告基因Jurkat細(xì)胞系文獻(xiàn)參考：

Xu WD, et al., 2022 Front. Immunol. 13: 891328

https://www.amyjet.com/products/BPS-78811.shtml