RNAlater 具備如下諸多顯著優(yōu)勢
RNAlater 具有極為卓越的特性:它賦予了研究者在時空上的極致自由,無論何時何地,皆可從容采集組織樣本,后續(xù)處理可按需靈活延期。其靈活性無與倫比,徹底擺脫了對液氮冷凍樣本的依賴,亦無需即刻將樣本送返實(shí)驗(yàn)室冷藏,同時摒棄了繁瑣的冷凍與研磨環(huán)節(jié),無疑是當(dāng)下組織采集領(lǐng)域的不二之選。在不同溫度條件下表現(xiàn)卓越,RNA 于 37℃可安然穩(wěn)定保存 1 天,25℃達(dá)一周之久,4℃長達(dá) 1 個月,在 -20℃及 -80℃更可實(shí)現(xiàn)長期儲存。用于后期轉(zhuǎn)錄組測序或表達(dá)譜芯片分析時,所獲聚類成果出類拔萃,相較液氮速凍處理的樣本優(yōu)勢盡顯。
RNAlater 溶液的使用方法如下
使用 RNAlater 溶液時,首先需將切割后尺寸小于 0.5 厘米的組織浸沒于 5 至 10 倍體積的室溫 RNAlater 溶液內(nèi),例如 0.5 克的樣品,2.0 至 5.0 毫升的 RNAlater 溶液即可滿足基本需求。因 RNAlater 溶液需滲入細(xì)胞方可穩(wěn)定 RNA,故完成浸沒操作后,樣品可于室溫(25℃)存放 1 周,4℃存放 1 個月,或在 -20℃與 -80℃條件下長期儲存。
當(dāng)進(jìn)行 RNA 提取或分離操作時,將組織從 RNAlater 溶液中取出,后續(xù)步驟與剛采集后的組織處理方式相同。盡管部分堅(jiān)硬組織如骨頭可能需采用更劇烈的破碎手段,但多數(shù)組織可直接置于裂解緩沖液中,或進(jìn)行勻漿化處理。經(jīng) RNAlater 溶液處理且冰凍的樣品,可用研缽和研杵研磨,亦或解凍后按新鮮組織的處理方式操作,且均不會對 RNA 質(zhì)量產(chǎn)生影響。
RNAlater 溶液在維持 RNA 完整性方面表現(xiàn)出色,即便對于那些 RNA 酶含量較高、通常難以提取完整 RNA 的組織(如脾臟),也能成功實(shí)現(xiàn) RNA 完整性的有效維持。
與各類 RNA 分離流程均具備良好的兼容性
RNAlater 溶液可適配多種 RNA 提取手段以契合后續(xù)建庫之需,諸如裂解 RNA 一步提取法、硅膜柱吸附法、酸性苯酚提取法,以及運(yùn)用 oligo (dT) 對 mRNA 進(jìn)行選擇性分離均可適用。組織樣本自 RNAlater 溶液中取出極為便捷,能如同新鮮組織一般在 RNA 裂解液(例如 TriZol 等)里予以處理。
再者,經(jīng) RNAlater 處理的組織亦能先行冰凍研磨,而后添加至裂解液內(nèi)。懸浮細(xì)胞中的 RNAlater 溶液可借助離心予以去除,隨后加入裂解緩沖液,在部分情形下,RNAlater 溶液能夠與細(xì)胞一同徑直加入到裂解緩沖液之中。
RNAlater 溶液應(yīng)用實(shí)例展示
RNAlater 溶液經(jīng)廣泛測試,涵蓋各類哺乳動物組織、血液、植物、細(xì)菌、非洲蟾蜍、魚類以及果蠅等生物樣本類型,其適用場景極為豐富:
- 于 RNA 酶含量豐富的組織,如脾臟或胰臟中,可有效守護(hù) RNA 的完整性,即便在不同時間點(diǎn)采集樣本,也無需即刻處理各時間點(diǎn)所取樣本。
- 經(jīng)其處理后的樣本可用于后續(xù)的顯微分離操作,為精細(xì)的生物學(xué)研究提供有力支持。
- 能夠填充動物體腔或用于浸泡器官,在長時間的解剖操作進(jìn)程中,確保 RNA 處于穩(wěn)定狀態(tài)。
- 可在不具備即時進(jìn)行 RNA 分離條件的場所進(jìn)行樣本采集工作,極大地拓展了樣本獲取的靈活性。
- 如需進(jìn)行隔夜運(yùn)輸,借助冰浴甚至在室溫條件下即可運(yùn)輸樣本,為樣本的轉(zhuǎn)運(yùn)提供便利且安全的方式。
RNAlater 所適配的組織類型
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