CBA原理介紹：

Cytometric Bead Array（CBA），也就是細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)，是依托流式細(xì)胞檢測(cè)體系的多重蛋白定量檢測(cè)手段，能夠在單一樣品里同步檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)。BD 公司巧妙借助流式細(xì)胞儀可對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行級(jí)數(shù)放大的特質(zhì)，把待檢測(cè)的可溶性因子附著于直徑近似細(xì)胞的微粒之上，以此達(dá)成對(duì)受檢樣品內(nèi)各類可溶性因子的檢測(cè)目的。

CBA 的基本原理和 ELISA 檢測(cè)較為相似，即運(yùn)用微小且分散的顆粒來捕獲液體待測(cè)物，然后憑借流式細(xì)胞儀檢測(cè)類似 “三明治” 結(jié)構(gòu)的顆粒 - 待測(cè)物復(fù)合體所釋放的熒光，進(jìn)而確定待測(cè)物的數(shù)量。

CBA詳細(xì)介紹：

CBA 的微球尺寸均一，具備特定的熒光強(qiáng)度，其表面包被有適用于特定分析（比如其他抗體或者可溶性蛋白）的特異性捕獲抗體，這就如同 ELISA 孔板的捕獲表面。當(dāng)微球與待測(cè)樣品溶液相混合時(shí)，微球上的特異性抗體便會(huì)和樣品（血清、血漿或者細(xì)胞培養(yǎng)液）里對(duì)應(yīng)的抗原或蛋白相結(jié)合，接著加入帶有熒光標(biāo)記的檢測(cè)抗體，如此便會(huì)形成 “三明治” 夾心復(fù)合物。最后借助流式細(xì)胞儀針對(duì)特異性目的蛋白實(shí)施檢測(cè)。CBA 的每種微球都攜帶著不同強(qiáng)度的紅色熒光，在流式細(xì)胞儀的 FL3 通道通過檢測(cè)微球熒光強(qiáng)度的差異來定性目的蛋白；檢測(cè)抗體則帶有 PE 熒光素標(biāo)記，在流式細(xì)胞儀的 FL2 通道進(jìn)行檢測(cè)，依靠檢測(cè)抗體的 PE 熒光強(qiáng)度來定量目的蛋白。

CBA技術(shù)特點(diǎn)：

CBA 技術(shù)具有諸多特點(diǎn)：它擁有流式細(xì)胞儀寬范圍熒光檢測(cè)的特性，對(duì)樣本的需求量極少，檢測(cè)更為迅速且精準(zhǔn)。具體而言：其一，能夠輕松達(dá)成多重檢測(cè)，單個(gè)樣本里最多可對(duì) 75 個(gè)目的蛋白進(jìn)行精確的定量分析。其二，樣本所需量極小，僅需 50μL 溶液就能開展一次檢測(cè)。其三，具備更高的靈敏度，分析靈敏度可高達(dá) 2.8pg/mL。其四，靈敏度更高、檢測(cè)范圍更寬且重復(fù)性更佳。CBA 技術(shù)能使蛋白定量的分析靈敏度達(dá)到 pg/ml 級(jí)別，檢測(cè)范圍為 0 - 5000pg/ml，并且所有分析僅需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)抗體的熒光強(qiáng)度來定量目的蛋白，有效避免了 ELISA 反應(yīng)中因酶聯(lián)放大而產(chǎn)生的假陽性。其五，檢測(cè)對(duì)象可靈活組合，即 BD CBA Flex Set。CBA 試劑盒是同時(shí)檢測(cè)已配好的 6 個(gè)指標(biāo)，形式相對(duì)固定。為滿足不同客戶的實(shí)際需求與研究興趣，BD 在 2005 年初推出了 CBA Flex set。它打破了 CBA 試劑盒的固定模式，轉(zhuǎn)變?yōu)榭勺杂山M合、靈活搭配的形式。使用者能夠依據(jù)自身需要組合不同的捕獲微球來檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)，最多能同時(shí)檢測(cè) 75 個(gè)指標(biāo)。除了具備 CBA 試劑盒的優(yōu)勢(shì)外，F(xiàn)lex Set 還配備了獨(dú)立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software），并且能夠在 BD FACSArray Bioanalyzer 上直接采用 96 孔和 384 孔板進(jìn)行操作。CBA Flex set 給予研究者更為靈活、自由的選擇空間，進(jìn)一步豐富了 CBA 產(chǎn)品線，其種類涵蓋免疫、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等諸多領(lǐng)域的蛋白定量分析。其六，操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力。CBA 技術(shù)采用芯片式集成測(cè)定，所有檢測(cè)僅需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線，就能計(jì)算出每種待測(cè)蛋白的濃度；操作流程簡(jiǎn)單，整個(gè)過程僅需 3.5 小時(shí)，還可對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)分析，縮減了檢測(cè)時(shí)間，提升了檢測(cè)效率。其七，擁有強(qiáng)大的軟件分析系統(tǒng)。BD CBA 軟件的數(shù)據(jù)處理能力極為強(qiáng)大，能夠直接將目標(biāo)蛋白的檢測(cè)結(jié)果換算成標(biāo)準(zhǔn)濃度；除了為用戶提供待測(cè)物的計(jì)數(shù)結(jié)果外，還能提供可視輪廓或信號(hào)圖形，以輔助用戶獲取更多信息。該軟件有適用于 Macintosh 和 Microsoft 系統(tǒng)的兩個(gè)版本可供選擇。與傳統(tǒng)的液相蛋白定量技術(shù)相比，CBA 技術(shù)屬于一種 “多元” 且 “同步” 的檢測(cè)技術(shù)。

CBA方法與Elisa方法的優(yōu)勢(shì)：

樣本量需求極為精簡(jiǎn)：僅需 25 微升樣本，便可同時(shí)對(duì)多個(gè)因子展開檢測(cè)。

數(shù)據(jù)精準(zhǔn)且可靠：源自同一份樣本的多個(gè)因子檢測(cè)結(jié)果，相互印證，可信度高。

檢測(cè)速率高效快捷：能夠同時(shí)檢測(cè)多個(gè)因子，極大地節(jié)省了檢測(cè)時(shí)間成本。

檢測(cè)范圍廣泛全面：涵蓋多種類型因子，滿足多樣化檢測(cè)需求。

成本效益優(yōu)勢(shì)顯著：隨著檢測(cè)因子數(shù)量增多，單個(gè)因子的平均檢測(cè)成本大幅降低，性價(jià)比極高。

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