今日分享的文獻(xiàn)乃是作者對(duì)眾多文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)予以總結(jié)后，于檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞髓系細(xì)胞群體時(shí)所遇共性難題的深度剖析與有效解決之道。該文獻(xiàn)系 12 年發(fā)表，雖歷時(shí)已久，然其經(jīng)典價(jià)值恒在，值得當(dāng)下借鑒。文中有兩大創(chuàng)新亮點(diǎn)。其一，以 Ly6C/Ly6G 檢測(cè)髓系分群相較 Gr-1 更具優(yōu)勢(shì)；其二，在檢測(cè)髓系細(xì)胞時(shí)，F(xiàn)4/80 并非必需抗體，因其染色過程實(shí)驗(yàn)質(zhì)量波動(dòng)較大。且常用檢測(cè)髓系細(xì)胞的標(biāo)志物（CD11b、CD11c、F4/80、Gr-1、Ly6C 及 Ly6G）尚無標(biāo)準(zhǔn)流程。

且看作者的實(shí)驗(yàn)方案。先明確若干共識(shí)：在穩(wěn)定狀態(tài)下，小鼠淋巴組織中的巨噬細(xì)胞群被視作源于血液中的單核細(xì)胞。小鼠單核細(xì)胞分為兩類，經(jīng)典型（Ly6C++CD43CCR2+CD62L+CX3CR1Low）與非經(jīng)典型（Ly6C-CD43+CCR2-CD62L-CX3CR1Hi）；小鼠巨噬細(xì)胞亦分兩類，Ly6C（或 Gr-1）Hi 群體為經(jīng)典或炎癥型，Ly6C（或 Gr-1）Low - neg 群體為非經(jīng)典或 “常駐” 型，且兩類群體均表達(dá) F4/80（125kd 跨膜糖蛋白）。

首要任務(wù)是確定分析的核心目標(biāo)群體。

先著眼于 CK1 群體（1panel），其可細(xì)分為四個(gè)亞群：
其一，(A) Gr - 1Hi SSC Int 細(xì)胞（中性粒細(xì)胞）；
其二，(B) Gr - 1Lo - neg SSCHi 細(xì)胞（嗜酸性粒細(xì)胞）且 MHC Class II - 與 CD115 - （詳見附加材料 Fig. 5）；
其三，(C) Gr - 1Lo - neg SSCLo 細(xì)胞（單核細(xì)胞 / 巨噬細(xì)胞）且 MHC Class II + /- CD115 - （以紅色柱狀圖呈現(xiàn)）；
其四，(D) Gr - 1 + SSCLo 細(xì)胞（單核細(xì)胞 / 巨噬細(xì)胞）且 MHC Class II - CD115 + /- （以藍(lán)色柱狀圖呈現(xiàn)）。

再審視作者用于對(duì)比的 CK2 群體（2panel），同樣可分為四個(gè)亞群：
其一，(A) Ly6GHi CD11b + 細(xì)胞（中性粒細(xì)胞）；
其二，(B) Ly6CLo - neg Ly6G - SSCHi 細(xì)胞（嗜酸性粒細(xì)胞）且 MHC Class II - 與 CD115 - （詳見附加材料 Fig. 5）；
其三，(C) Ly6CLo - neg Ly6G - SSCLo 細(xì)胞（單核細(xì)胞 / 巨噬細(xì)胞）且 MHCII + /- 和 CD115 - （以紅色柱狀圖呈現(xiàn)）；
其四，(D) Ly6C + Ly6G - SSCLo 細(xì)胞（單核細(xì)胞 / 巨噬細(xì)胞）且 MHC Class II - 和 CD115 + /- （以藍(lán)色柱狀圖呈現(xiàn)）。

文章中的另一亮點(diǎn)亦頗為贊賞，即無需借助 F4/80 便可對(duì)單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞加以鑒別。 通過參照 A 圖與 B 圖展開分析，其內(nèi)在邏輯如出一轍。 關(guān)鍵在于采用 NK1.1 來替代 F4/80。

最后運(yùn)用一整套標(biāo)志物對(duì)在不使用 F4/80 的情況下分析小鼠脾細(xì)胞中的單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞亞群的群體表達(dá)狀況予以了驗(yàn)證。

上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司

試劑 | 耗材 | 儀器 | 軟件 | 定制 | 實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 供應(yīng)鏈

免費(fèi)熱線：4008-168-068

咨詢郵箱：info@univ-bio.com

訂購(gòu)商城：www.univ-bio.com

微信公眾平臺(tái)：優(yōu)寧維抗體專家，歡迎關(guān)注！

小優(yōu)博士（小程序）：5大課堂, 讓你的科研不再難！