摘要
遠志皂苷元（Senegenin）與辣根過氧化物酶（HRP）通過化學交聯(lián)形成熒光-物Senegenin-HRP的合成方法，并驗證其在酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）中的檢測效能。通過優(yōu)化交聯(lián)條件，-物保留HRP催化活性，可特異性識別遠志皂苷元抗體，檢測靈敏度達0.1 ng/mL，為天然產(chǎn)物免疫分析提供新工具。
1. 引言
遠志皂苷元是中藥遠志中分離的五環(huán)三萜類活性成分，具有抗炎、抗衰老及神經(jīng)保護藥理作用。傳統(tǒng)檢測方法依賴色譜分析，但存在操作復雜、靈敏度不足等問題。本研究將Senegenin與HRP共價結合，構建雙功能-物，旨在開發(fā)高靈敏的免疫學檢測方案。
2. 材料與方法
試劑：遠志皂苷元（純度98%）、HRP（RZ>3.0）、N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺（EDC）。
合成步驟：
活化羧基：Senegenin（10 mg）溶于DMSO，加入EDC/NHS（摩爾比1:1.2:1.2），室溫避光攪拌2 h。
-反應：滴加HRP溶液（5 mg/mL），4℃反應12 h，超濾純化得Senegenin-HRP。
表征：紫外光譜掃描（200-600 nm）驗證偶聯(lián)成功，BCIP/NBT顯色法檢測酶活性。
3. 結果與討論
光譜特性：-物在403 nm處新增吸收峰（HRP特征峰），表明共價結合成功。
酶活性保留：與未-HRP相比，Senegenin-HRP催化TMB顯色效率達82.3±4.5%。
ELISA應用：構建標準曲線（R²=0.991），檢測限0.1 ng/mL，線性范圍0.1-100 ng/mL，回收率95.6-103.2%。
結論
Senegenin-HRP-物兼具抗原識別與信號放大功能，顯著提升遠志皂苷元檢測靈敏度，適用于中藥質量控制及藥代動力學研究。
相關產(chǎn)品:
FITC標記漢黃芩苷 Wogonoside
FITC標記辣椒堿 Capsaicin-HRP
FITC標記辣椒素 Vanillylnonanamide
FITC標記膽紅素 Bilirubin
FITC標記蘆丁 Rutin
FITC標記齊墩果酸 Oleanolic Acid
FITC標記青蒿素 Artemisinin
FITC標記馬兜鈴酸 Aristolochic Acid
FITC標記路路通酸 Liquidambaric Acid