宿主細胞DNA(Host Cell DNA)是指用于生產(chǎn)生物制品（如重組蛋白、疫苗、生物藥物等）細胞中的遺傳物質(zhì)。在生物技術和生物制藥行業(yè)中，這類生物制品通常是通過在特定宿主細胞中表達目標基因來生產(chǎn)的。這些宿主細胞的類型多樣，包括細菌（例如大腸桿菌）、酵母、昆蟲細胞和哺乳動物細胞等。 然而在實際生產(chǎn)和純化過程中，宿主細胞DNA往往會不可避免地遷移到最終產(chǎn)品中，由于其可能導致安全性問題（如潛在的基因毒性或免疫反應），因此，監(jiān)管機構(gòu)通常會制定嚴格的宿主細胞DNA殘留限制標準，以確保生物制品的安全性和有效性。
宿主DNA殘留標準
我國藥典及美國FDA均對宿主殘留DNA量進行明文規(guī)范：例如2020版《中國藥典》明確規(guī)定用Vero細胞生產(chǎn)人用狂犬病疫苗，Vero細胞DNA殘留應不高于3ng/劑；基于Vero細胞的脊髓灰質(zhì)炎疫苗，DNA殘留量不高于50pg/劑；基于CHO細胞的乙肝疫苗，DNA殘留量不高于10pg/劑。
表 宿主細胞殘留DNA的限定標準
隨著技術的發(fā)展，人們認識到，除了要減少殘留DNA的量，也應該降低宿主DNA片段的大小至功能基因大?。ù蠹s200bp）以下，從而減少致瘤性和感染性風險。 基于此，CDE 2022年5月發(fā)布的《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學研究與評價技術 指導原則（試行）》中明確指出，生產(chǎn)若使用了腫瘤細胞系（如Hela細胞）、致瘤細胞系，或攜帶有致瘤基因、病毒來源序列的細胞（如HEK 293T細胞），在確保無完整活細胞殘留的同時，需對DNA的殘留量和殘留片段大小進行控制，合理擬定標準限度。如有可能，建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi)， DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。
表 宿主細胞殘留DNA片段風險等級
去除宿主DNA常見方法
宿主DNA的去除可以通過多種方法實現(xiàn)，每種方法都有其特定的優(yōu)缺點，目前常見的方法主要為層析法、酶法、沉淀法等。傳統(tǒng)單一的方法均存在核酸殘留去除不凈、工作量大、耗時長等缺陷，廣譜核酸酶則可完美解決此類難點。
廣譜核酸酶，又稱為全能核酸酶，一種來源于粘質(zhì)沙氏菌（Serratia marcescens，又稱靈桿菌）的非特異性核酸內(nèi)切酶，它不含有原核生物表達的細菌內(nèi)毒素。無論是實驗研究還是工業(yè)生產(chǎn)，廣譜核酸酶都是目前少有能夠同時高效降解任何形式DNA和RNA的酶。
廣譜核酸酶的使用與優(yōu)勢
廣譜核酸酶能夠降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線性、超螺旋和環(huán)狀DNA、RNA及基因組DNA，對核酸序列沒有特異性。在純化工藝中使用廣譜核酸酶，可有效降低細胞裂解液粘度，改善蛋白純化工藝，高效去除重組蛋白制品核酸污染，大幅降低終產(chǎn)品污染風險，滿足法規(guī)要求，在細胞治療、病毒載體疫苗等領域應用廣泛。
核酸酶的作用位點
廣譜核酸酶在廣泛的條件下仍有很強的生物酶活性，跟大多數(shù)生物酶一樣，核酸酶的活性也會隨溫度、pH值、Mg2+、緩沖體系和底物濃度等因素的改變而變化。對于廣譜核酸酶使用方法，可以點擊小編之前發(fā)布的文章《干貨分享| 廣譜核酸酶的使用，你學會了嗎？》進行了解。
相關產(chǎn)品
高度穩(wěn)定性
比活性大于1000 KU/mg蛋白
無動物源性成分
避免原核細胞的內(nèi)毒素污染
不含蛋白酶殘留
供應穩(wěn)定，到貨快