--細(xì) 胞 基 本 信 息---
細(xì)胞名稱: AR42J(大鼠胰腺外分泌細(xì)胞)
細(xì)胞別稱: AR4-2J; AR-42J
細(xì)胞貨號: SNL-207
生長特性: 貼壁
培養(yǎng)條件: DMEM+20% FBS+1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境: 空氣,95%; 二氧化碳 (CO2),5%;37℃
細(xì)胞簡介: AR42J細(xì)胞是從患有腫瘤的大鼠胰腺中分離的上皮樣細(xì)胞。AR42J細(xì)胞是一種外分泌細(xì)胞,具有淀粉酶和其它外分泌酶,具有胰島素受體和糖皮質(zhì)激素受體。AR42J細(xì)胞分泌活動可由糖皮質(zhì)激素刺激誘導(dǎo),同時出現(xiàn)廣泛的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重構(gòu)。AR42J細(xì)胞可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng),也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。
細(xì)胞正常生長形態(tài)照片
AR42J細(xì)胞培養(yǎng)注意事項
- 聚集貼壁生長
AR42J細(xì)胞聚集成簇貼壁生長,難以完全匯合至100%。實際細(xì)胞密度比觀察密度要大,團(tuán)塊較大時需要及時傳代,避免細(xì)胞密度過大導(dǎo)致營養(yǎng)不足而狀態(tài)變差。
- 生長緩慢
AR42J細(xì)胞生長較慢,建議使用20% 血清培養(yǎng)。接種密度過低時細(xì)胞生長速度將會更慢,推薦傳代比例1:2。
- 碎片較多
AR42J細(xì)胞培養(yǎng)時背景中可能有細(xì)胞碎片和黑點,一般不影響細(xì)胞生長。若細(xì)胞碎片較多可以通過PBS潤洗或換液清除。如果黑點較多同時出現(xiàn)細(xì)胞變形、大量死亡或不生長的情況,應(yīng)該考慮操作不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞受損或者存在支原體污染。
- 貼壁較弱
AR42J細(xì)胞貼壁較弱,傳代時注意消化時間,避免消化過度。接種后靜置培養(yǎng),不頻繁擾動細(xì)胞。若培養(yǎng)瓶本身無法支持細(xì)胞貼壁生長,建議對培養(yǎng)瓶提前包被后再用于培養(yǎng)該細(xì)胞。
- 細(xì)胞對血清要求較高
建議使用經(jīng)過培養(yǎng)篩選的專用培養(yǎng)基及血清,血清品質(zhì)對該細(xì)胞生長影響甚大。
AR42J細(xì)胞傳代方法
- 準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、胰酶、PBS、離心管、培養(yǎng)瓶以及無菌槍頭等;(試劑提前預(yù)熱)
- 抽走培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,加5mL PBS潤洗1-2遍,清除殘留培養(yǎng)基;
- 盡量吸干潤洗的PBS后加1mL胰酶,搖晃使胰酶均勻覆蓋瓶底,放置培養(yǎng)箱37℃消化適當(dāng)時間,鏡下可見細(xì)胞明顯回縮,部分細(xì)胞開始脫落時立即加入3-4mL含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹落貼壁的細(xì)胞;
Tips:注意控制吹打力度輕柔,吹打次數(shù)不可過多,避免機械損傷
- 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中,1000rpm,3min離心收集細(xì)胞;
- 在新的培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基;(T25推薦10mL,T75推薦20mL)
- 離心完成后,棄上清,加入適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸吹散細(xì)胞,將細(xì)胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中,十字法或8字法混勻,然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),注意培養(yǎng)瓶蓋透氣;
Tips:推薦傳代比例1:2
AR42J細(xì)胞凍存方法
- 配制程序性凍存液,準(zhǔn)備相應(yīng)數(shù)量凍存管并做好標(biāo)記。
Tips:推薦凍存液配方92%FBS+8%DMSO或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO
- 先將細(xì)胞按傳代步驟消化、離心、棄上清,獲得細(xì)胞沉淀;
- 加入適量程序性凍存液輕輕重懸細(xì)胞,并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管中;
- 將凍存管放入程序性凍存盒,放入-80℃冰箱過夜;
- 轉(zhuǎn)移凍存細(xì)胞至液氮保存并登記細(xì)胞保存位置
Tips:
- 液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測凍存細(xì)胞的活性,若活性合格即可長期保存。
- 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用,若使用非程序凍存液請按產(chǎn)品說明書處理降溫過程。
- T25培養(yǎng)瓶長滿通常可凍存2-3管,10cm皿長滿通??蓛龃?-4管。
- 凍存密度低將導(dǎo)致復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)不佳。
AR42J細(xì)胞復(fù)蘇方法
- 提前將水浴鍋預(yù)熱至37℃,培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫或37℃,離心機設(shè)置好轉(zhuǎn)速;
- 將細(xì)胞從液氮罐中取出,觀察管內(nèi)無液氮的情況下,捏住管蓋,將細(xì)胞凍存部分浸入水浴鍋迅速搖晃,細(xì)胞融化至米粒大小冰塊時終止水浴,融化過程不超過2min;
Tips:
- 若液氮或冰箱距離細(xì)胞房較遠(yuǎn),細(xì)胞需要放在干冰或冰盒上運送至細(xì)胞房。
- 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮,取出細(xì)胞時震動不要過大。水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮,若有液氮需靜置一會待液氮完全蒸發(fā)后再水浴。做好防護(hù),避免凍存管炸開導(dǎo)致受傷。
- 水浴時使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源,避免污染。
- 直接將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心2min,不同離心機具體轉(zhuǎn)速會有差異
- 離心完成后棄上清,用預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管,輕柔重懸細(xì)胞后接種至培養(yǎng)瓶中,輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱;
- 復(fù)蘇24小時后觀察細(xì)胞貼壁情況。
Tips:
- 整個細(xì)胞復(fù)蘇過程在盡可能5-10min內(nèi)完成。
- 該細(xì)胞貼壁需要穩(wěn)定的環(huán)境,復(fù)蘇完成后請勿頻繁將細(xì)胞拿出觀察。
AR42J細(xì)胞收貨攻略
- 常溫細(xì)胞
- 收貨后,拆開外包裝,用75%酒精消毒T25瓶表面,放37℃培養(yǎng)箱靜置4h以上;
- 吸走大部分培養(yǎng)基并留10-12 mL,顯微鏡下拍照保存細(xì)胞狀態(tài)照片,觀察細(xì)胞密度,若細(xì)胞密度大于80%即可按比例傳代(首次傳代比例建議1:2),若細(xì)胞密度低于70%可以留10-12 mL繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞密度80%以上再進(jìn)行傳代培養(yǎng);
- 凍存細(xì)胞
- 細(xì)胞收貨后盡快開箱檢查,若干冰充足可以取出細(xì)胞迅速置于-80℃冰箱(2-3天內(nèi)復(fù)蘇)短期保存或液氮中長期保存,若干冰完全揮發(fā)建議立即復(fù)蘇細(xì)胞并聯(lián)系銷售人員解決;
- 凍存細(xì)胞建議盡快復(fù)蘇一管培養(yǎng)檢查,以免超出售后期,復(fù)蘇步驟參考復(fù)蘇攻略;
- 復(fù)蘇一管細(xì)胞出現(xiàn)異常及時聯(lián)系銷售人員,在專業(yè)技術(shù)支持的指導(dǎo)下進(jìn)行下一步操作;
Tips:
- 細(xì)胞收貨出現(xiàn)漏液、培養(yǎng)瓶破損、干冰完全揮發(fā)等異常情況時,及時拍照聯(lián)系銷售人員;
- 尚恩生物T25瓶發(fā)貨的細(xì)胞內(nèi)含對應(yīng)細(xì)胞的完全培養(yǎng)基,可以收集原裝培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基經(jīng)1500rpm離心5min后,取上清于4℃保存用于后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng);
常見問題及解決方案
NO.1細(xì)胞密度怎么計算的?
嚴(yán)格意義上,細(xì)胞密度需要收集細(xì)胞懸液計數(shù)細(xì)胞數(shù)量,但在實際培養(yǎng)過程中,并不需要為了精確控制細(xì)胞數(shù)量而消化細(xì)胞計數(shù)。因此,常用的細(xì)胞密度指細(xì)胞相對于最大生長密度的比值,貼壁細(xì)胞可以粗略的用細(xì)胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示,即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部,有細(xì)胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值,當(dāng)然這種表達(dá)方式受限于單個細(xì)胞生長不同密度時所占面積不同導(dǎo)致并不嚴(yán)謹(jǐn),但也是相當(dāng)直觀、簡便的表現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)的一種方式。
NO.2培養(yǎng)過程中細(xì)胞碎片較多怎么處理?
- 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光,這個屬于細(xì)胞自身特性,無法清除也無法改變,大部分細(xì)胞都會有這種現(xiàn)象,只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別,細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加,建議使用合適的培養(yǎng)條件。
- 細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物,可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除,再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細(xì)胞密度70-80%左右消化處理細(xì)胞,消化完成后加完全培養(yǎng)基終止消化,混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。再加5mL PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。
NO.3細(xì)胞具體消化時間是多久?
每個實驗室用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的,不能完全規(guī)定消化時間,以實際消化效果和實驗經(jīng)驗為準(zhǔn)。
產(chǎn)品推薦:
【SNL-207】 AR42J(大鼠胰腺外分泌細(xì)胞) (種屬鑒定正確)
【SNLM-207】AR42J細(xì)胞專用完全培養(yǎng)基