背景[1-4]
肝星狀細(xì)胞是ECM的主要來源，HSC激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞(MFC)，各種致纖維化因素均把HSC作為最終靶細(xì)胞。肝星狀細(xì)胞激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞(MFC)，各種致纖維化因素均把HSC作為最終靶細(xì)胞，正常情況下肝星狀細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)。當(dāng)肝臟受到炎癥或機(jī)械刺激等損傷時，肝星狀細(xì)胞被激活，其表型由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚汀?/p>
激活的肝星狀細(xì)胞一方面通過增生和分泌細(xì)胞外基質(zhì)參與肝纖維化的形成和肝內(nèi)結(jié)構(gòu)的重建，另一方面通過細(xì)胞收縮使肝竇內(nèi)壓升高。肝臟星狀細(xì)胞占肝臟固有細(xì)胞總數(shù)的15%，占非實質(zhì)細(xì)胞的30%左右。HSC存在于Disse腔中，呈梭形或多邊形，胞漿內(nèi)有多個富含維生素A的脂滴，其細(xì)長的突起向外延伸環(huán)繞在血竇內(nèi)皮細(xì)胞外面，是體內(nèi)儲存視黃醛衍生物的首要部位。在正常肝臟中，星狀細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)，不表達(dá)α平滑肌肌動蛋白（α-SMA），增殖活性低，合成膠原能力低，其主要功能是貯存視黃醛類。
肝星狀細(xì)胞位于肝竇周Disse腔內(nèi)，約占肝臟所有細(xì)胞的13%。在規(guī)HE染色的肝組織切片中，不能顯示星狀細(xì)胞，但可用免疫組織化學(xué)將其定位，并可將其分離進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)。正常情況下肝星狀細(xì)胞呈靜止?fàn)顟B(tài)，它在肝臟中的生理功能主要有參與維生素A的代謝，儲存脂肪的功能，肝星狀細(xì)胞的胞漿中含有類視黃醇物質(zhì)的脂滴，是維生素A的主要儲存處。肝星狀細(xì)胞狀細(xì)胞還有調(diào)節(jié)血管和肝竇血流的作用。
在病理條件下如肝臟受到物理、化學(xué)及病毒感染生物因素的刺激時，肝星狀細(xì)胞增殖并激活，轉(zhuǎn)變?yōu)?ldquo;肌成纖維細(xì)胞”，表達(dá)α-平滑肌動蛋白、合成ECM等。當(dāng)肝臟有炎癥時，肝星狀細(xì)胞發(fā)生激活，Gressner等研究提出了肝星狀細(xì)胞激活的“三步級聯(lián)反應(yīng)”。模式激活型的肝星狀細(xì)胞具有以下特征：
1、胞體增大，胞突伸展。胞質(zhì)中脂滴消失，VitA含量減少。胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)織網(wǎng)、高爾基體發(fā)達(dá)，具有旺盛的蛋白質(zhì)合成能力；
2、細(xì)胞增生頻率增加，并且向肝損傷部位遷徙；
3、表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、波形蛋白（vimentin）及結(jié)蛋白（desmin），成為肌纖維樣母細(xì)胞；
4、收縮性增強(qiáng)；
5、ECM分泌增加；
6、細(xì)胞因子、趨化因子及受體分泌增加；
7、TIMP合成及分泌增加，使ECM成分降解減少。其中α-SMA的表達(dá)為HSC激活的標(biāo)志。
應(yīng)用[5][6]
可用于永生化人肝星狀細(xì)胞系的建立及其對肝細(xì)胞功能與肝祖細(xì)胞分化的影響：
采用SV40LT重組反轉(zhuǎn)錄病毒感染原代人肝星狀細(xì)胞,獲得永生化人肝星狀細(xì)胞系。采用電鏡技術(shù)、RT-PCR等分析永生化人肝星狀細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性和功能等。結(jié)果：建立一株永生化人肝星狀細(xì)胞系,命名為HSC-Li。該細(xì)胞系具有典型的肝星狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征；HSC-Li細(xì)胞的Ⅰ、Ⅱ型膠原、HGF等mRNA表達(dá)為陽性；HSC-Li細(xì)胞的a-SMA、Vimentin、GFAP和SV40LT蛋白表達(dá)為陽性。HSC-Li細(xì)胞分泌VEGF、HGF、IL-6、TGF-betal等多種細(xì)胞因子和炎癥因子。
結(jié)論：建立了一株永生化人肝星狀細(xì)胞系HSC-Li,該細(xì)胞系具有人肝星狀細(xì)胞的生物學(xué)特性和功能；可為肝細(xì)胞與肝星狀細(xì)胞、肝祖細(xì)胞與肝星狀細(xì)胞共培養(yǎng)研究提供理想的細(xì)胞模型。通過直接接觸共培養(yǎng)、間接接觸共培養(yǎng)方式進(jìn)行永生化人肝細(xì)胞與永生化人肝星狀細(xì)胞共培養(yǎng)研究,測定永生化人肝細(xì)胞共培養(yǎng)24h、48h、72h后ALB、CYP3A5、CYP2E1、UGT2b7等基因的表達(dá)水平,以及測定CYP1A2活力。
參考文獻(xiàn)
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