背景[1-7]
小鼠MAPK信號通路PCR芯片可以測定多個與MAPK信號通路有關的基因，這些基因包括MKKK、MKK、MAPK家族成員，以及MAPK信號通路的轉錄因子及其誘導表達的基因，Raf調節(jié)蛋白、MEKK1相互作用蛋白和Erk1/2調節(jié)的細胞周期調節(jié)蛋白也包含在內，此外還含有支架蛋白和錨定蛋白。
MAPK，絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinases，MAPKs）是細胞內的一類絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶。研究證實，MAPKs信號轉導通路存在于大多數細胞內，在將細胞外刺激信號轉導至細胞及其核內，并引起細胞生物學反應（如細胞增殖、分化、轉化及凋亡等）的過程中具有至關重要的作用。研究表明，MAPKs信號轉導通路在細胞內具有生物進化的高度保守性，在低等原核細胞和高等哺乳類細胞內，目前均已發(fā)現存在著多條并行的MAPKs信號通路，不同的細胞外刺激可使用不同的MAPKs信號通路，通過其相互調控而介導不同的細胞生物學反應。
MAPK信號通路成員：MKKK，MKK，MAPK；在未受刺激的細胞內，MAPK處于靜止狀態(tài)。細胞受到生長因子或其他因素刺激后，MAPK接收MKK和MKKK的活化信號而被激活，表現為逐級磷酸化，如生長因子、細胞因子、射線、滲透壓以及體液流過細胞表面時產生的切應力等因素都可以激活MAPK信號轉導通路。
應用[8][9]
用于小鼠腦缺血再灌注損傷細胞凋亡與MAPK信號通路影響的實驗研究:
腦血管疾病是目前嚴重危害人類健康的主要疾病之一,在我國每年死于腦血管病的患者多于心臟病及癌癥,居三大死因之首。缺血性腦血管病是威脅人類的常見病、多發(fā)病,因此尋找有效的治療手段并闡釋其機理仍然是目前腦科學領域的研究熱點。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)也稱為應激活化蛋白激酶(stress activated protein kinase,SAPK),是MAPK家族的重要成員,屬于進化上保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,是中樞神經系統(tǒng)內主要的信號轉導通路之一。
JNK信號通路可被細胞因子、生長因子、應激等多種因素激活,參與細胞增殖與分化、細胞形態(tài)維持、細胞骨架構建、細胞凋亡等多種生物反應。JNK在細胞應激反應中起重要作用,能被多種細胞外應激信號激活,因而也被稱為應激活化蛋白激酶。選用JNK基因敲除小鼠36只,按隨機數字表法隨機分為假手術組、模型組和電針組,其中假手術組、模型組和電針組每組又分為2h(小時)、1d(天)、3d(天)三個時間段組,共9小組,每小組4只小鼠。
模擬臨床腦梗塞的證型,選擇以基因敲除小鼠大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery oeelusion,MCAO)為模型,采用臨床常用的對腦缺血及其后遺癥有確定療效的針刺和電刺激結合起來的電針治療局灶性腦缺血。針對MAPK通路在腦缺血中作用途徑、作用機制這一關鍵問題,從多環(huán)節(jié)、多層次、多靶點上觀察電針對MAPK通路的影響及電針對腦缺血后海馬神經元的保護作用。
JNK是位于細胞質的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,含有雙磷酸化功能區(qū)Thr-Pro-Tyr,因JNK可以結合c-Jun氨基端活化結構域,并磷酸化其第63位和73位絲氨酸殘基而被命名為JNK。迄今已發(fā)現了由JNK1、JNK2JNK3的不同剪接形式組成的10種同源異型蛋白,JNK1和JNK2的表達具有廣泛性,JNK3僅在大腦、心臟和睪丸中表達。
目的：本實驗是想通過科學方法探索腦缺血/再灌注后腦內MAPK家族信號通路的調控及電針干預作用的影響,從而進一步了解電針治療對腦缺血/再灌注后腦內MAPK家族信號系統(tǒng)調控機制及細胞凋亡的影響。對“針刺刺激-復合信號調控-良性修養(yǎng)機制啟動是其腦缺血/再灌注后治療的關鍵作用機制之一”的科學假說加以探討,對研究電針對腦缺血/再灌注治療在干預機制有一定的參考意義。
參考文獻
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