自1979年推出以來，蛋白質(zhì)印跡（WB）成為一種簡(jiǎn)單而廉價(jià)的技術(shù)。目前，WB 被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的檢測(cè)和半定量及其表達(dá)水平的研究。在實(shí)際應(yīng)用中，我們經(jīng)常反復(fù)剝離和再檢測(cè)，以檢測(cè)印跡膜上的不同蛋白質(zhì)來節(jié)省時(shí)間和金錢。然而，每一輪剝離會(huì)去除一些轉(zhuǎn)移到印跡膜上面蛋白，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本文將介紹一種蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液的使用方法^[1]。

步驟（1）：采用蛋白質(zhì)免疫印跡膜，利用辣根過氧化物酶、化學(xué)發(fā)光試劑，進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)；

步驟（2）：洗去步驟（1）已使用的蛋白質(zhì)免疫印跡膜上的化學(xué)發(fā)光試劑；

步驟（3）：將步驟（2）洗去化學(xué)發(fā)光試劑的蛋白質(zhì)免疫印跡膜加入到權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液中進(jìn)行震蕩孵育；

步驟（4）：取出步驟（2）中的膜，用雙蒸水和/或TBST溶液洗滌，得到辣根過氧化物酶已經(jīng)失活的膜;

步驟（5）：采用步驟（4）得到辣根過氧化物酶已經(jīng)失活的膜，利用辣根過氧化物酶、化學(xué)發(fā)光試劑，進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)。

作為優(yōu)選，步驟（5）中所檢測(cè)的蛋白質(zhì)與步驟（1）所檢測(cè)的蛋白質(zhì)為非同種蛋白質(zhì)。

作為優(yōu)選，步驟（1）-步驟（4）重復(fù)循環(huán)至少兩次，在后所檢測(cè)的蛋白與在先所檢測(cè)的蛋白均為非同種蛋白。

所述蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液的配方中包括巴豆酸，所述巴豆酸的濃度為5-20%質(zhì)量比，通過巴豆酸滅活二抗標(biāo)記的辣根過氧化物酶(HRP)來實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)免疫印跡膜的再次使用，所述再生液及蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液的使用方法不影響抗體與印跡上的抗原之間的結(jié)合以及印跡膜上抗原含量的變化，并可以重復(fù)使用，并且在NC膜的處理中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：使用CA 預(yù)先孵育不僅可以穩(wěn)定 NC 膜結(jié)合蛋白質(zhì)，而且可以提高 NC 膜檢測(cè)的靈敏度。

參考文獻(xiàn)

[1] 一種蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液及其使用方法. CN115308402A