背景[1-7]
雞血清采用健康雞血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成，性狀為澄清液體，無噬菌體、超低內(nèi)毒素，無溶血無異物無細(xì)菌真菌支原體霉形體衣原體等，適用于試驗(yàn)室或生化科研相關(guān)試驗(yàn)，滿足不同科研實(shí)驗(yàn)的多種需求。
雞血清來源于非免疫的雞宿主，經(jīng)過脂質(zhì)萃取和含NaN3的PBS溶液透析，改善其透明度。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上，37℃度孵育10-30分鐘，清除血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。注意：封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白，且與一抗來源不同，可用與二抗相同來源的封閉血清。
雞血清各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)符合2005版《中華人民共和國藥典》第三部附錄的要求。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量3.5%～5.0%（w/v）3、血紅蛋白含量≤0.02%（w/v）4、無菌檢驗(yàn)陰性5、支原體檢驗(yàn)陰性、6、細(xì)菌內(nèi)毒素≤5（EU/ml）7、牛腹瀉病毒陰性8、大腸桿菌噬菌體陰性9、支持細(xì)胞增殖(Sp2/0-Ag14)生長(zhǎng)曲線（接種濃度）增殖濃度≥2.5×106個(gè)/ml細(xì)胞倍增時(shí)間≤15h、克隆率≥85％。
雞血清、血清的主要成分：血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡。
雞血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。血清必須貯存于–20～-70 oC，若存放于4度，不能超過一個(gè)月。如果一次無法用完一瓶，可將40～45 ml分裝于無菌50 ml離心管中，由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%，必須預(yù)留10%膨脹體積的空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂。
瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):從-20 oC或–70 oC取出放至4 oC冰箱溶解一天，再置于室溫下全溶后分裝，一般50 ml無菌離心管可分裝40～45 ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。切勿直接由–20 oC直接至37 oC解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37 oC太久，若在37 oC放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。
應(yīng)用[8][9]
用于雜交瘤細(xì)胞、骨質(zhì)瘤細(xì)胞、原代、傳代細(xì)胞等細(xì)胞培養(yǎng)及疫苗、診斷試劑生產(chǎn)；雞血清IgG的純化及其單抗制備與鑒定：
IgG是血清中主要的免疫球蛋白(Ig),占血清Ig總量的75%~80%,它是血液中主要的抗體成分,血清中IgG水平的測(cè)定,已是疫苗免疫效果評(píng)定和體液免疫研究的常用指標(biāo)。與常規(guī)免疫血清相比,單克隆抗體具有與抗原結(jié)合的高特異性,是免疫學(xué)和血清學(xué)研究的重要工具,在畜牧獸醫(yī)的疾病診斷與治療方面已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。在養(yǎng)禽業(yè)中,運(yùn)用這些單克隆抗體來檢測(cè)疫病特異性的抗體,對(duì)全面、系統(tǒng)地了解禽的機(jī)體對(duì)病原體感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)并采取相應(yīng)的防制措施有重要意義。
參考文獻(xiàn)
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[9]王駿俊.雞血清IgG的純化及其單抗制備與鑒定[D].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.