背景[1-6]
細(xì)胞流式檢測服務(wù)是一種在液體系統(tǒng)中，快速測定單個細(xì)胞或細(xì)胞器的生物、物理和化學(xué)特性，并根據(jù)這些特性將所需要的細(xì)胞或細(xì)胞器進行定量分析和分選的技術(shù)。它是一種可以快速、準(zhǔn)確的檢測細(xì)胞或者生物學(xué)顆粒的多種特性的技術(shù)，用來了解細(xì)胞群的均值和分布情況，并還可以分選感興趣的細(xì)胞、對該細(xì)胞做進一步的培養(yǎng)研究。
傳統(tǒng)上，根據(jù)胞外或表面表達(dá)的標(biāo)志物不同，流式細(xì)胞術(shù)可用于鑒定多種細(xì)胞匯集池內(nèi)不同的細(xì)胞類型，這種應(yīng)用通常稱為免疫表型分型。然而，這項技術(shù)還可輕松地應(yīng)用于胞內(nèi)靶標(biāo)檢測，并可成功地應(yīng)用于復(fù)雜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件的研究。流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)是一項新型的、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學(xué)分析技術(shù),它是集激光技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)、流體力學(xué)以及細(xì)胞免疫熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細(xì)胞分析技術(shù)。
流式細(xì)胞儀是應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)建立起來的儀器裝置。它使細(xì)胞或微粒在液流中流動,逐個通過一入射光束,并用高靈敏度檢測器記錄下散射光及各種熒光信號,從而得以對粒子進行多參數(shù)分析,包括諸如粒子形狀和大小、細(xì)胞周期、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、細(xì)菌表面抗原、細(xì)胞DNA內(nèi)含物等。FCM檢測的粒子一般為活性細(xì)胞,通過激光光源激發(fā)細(xì)胞上所標(biāo)記的熒光物質(zhì)的強度和顏色以及散射光的強度可以得到細(xì)胞內(nèi)部各種各樣的生物信息。
另外FCM還可進行細(xì)胞分選,可以根據(jù)所檢測細(xì)胞的某種性質(zhì)進行分選,并且如果分選的過程是在無菌條件下進行的,這些細(xì)胞還可以用來培養(yǎng)。流式細(xì)胞儀的工作原理是使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞或微粒逐個通過樣品池，同時由熒光探測器捕獲熒光信號并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角、側(cè)向散射角和不同熒光強度的電脈沖信號，經(jīng)計算機處理形成相應(yīng)的點圖，直方圖和加三維結(jié)構(gòu)圖像進行分析。
檢測范圍：
細(xì)胞結(jié)構(gòu)：細(xì)胞大小；細(xì)胞顆粒度；細(xì)胞表面積；核漿比例；DNA含量與細(xì)胞周期；蛋白質(zhì)含量
細(xì)胞功能：細(xì)胞表面/胞漿/核的特異性抗原；細(xì)胞活性；細(xì)胞內(nèi)外的細(xì)胞因子；激素結(jié)合位點；細(xì)胞受體；蛋白磷酸化；pH值；鈣離子濃度；細(xì)胞膜電位/線粒體膜電位
用于FCM的樣本是單細(xì)胞懸液，可以是血液、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液、各種體液、新鮮實體瘤的單細(xì)胞懸液以及石蠟包埋組織的單細(xì)胞懸液等。
服務(wù)內(nèi)容：
1.細(xì)胞表面分子的檢測與分析;
2.細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)抗原檢測與分析——如胞內(nèi)細(xì)胞因子、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg，CD4+CD25+Foxp3+);
3.細(xì)胞凋亡的檢測與分析——如PI單染法、Annexin-V-PI復(fù)染法、末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)、細(xì)胞周期特異性細(xì)胞凋亡的檢測(PI-Annexin-V，PA法);
4.DNA含量檢測與細(xì)胞周期的分析——如藥物對細(xì)胞周期的影響、流式細(xì)胞核型分析;
5.細(xì)胞增殖的檢測與分析。
應(yīng)用[7][8]
細(xì)胞流式檢測服務(wù)可用于白血病外周血細(xì)胞檢測對急性白血病復(fù)發(fā)判斷：
將流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用于白血病外周血細(xì)胞檢測對急性白血病患者復(fù)發(fā)狀況的判斷效果。對所有實驗對象采用流式細(xì)胞術(shù)進行外周血標(biāo)本檢測,并做好相應(yīng)的骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)實驗。分析流式細(xì)胞術(shù)對急性髓系白血病和急性淋巴白血病檢驗中的特異性和敏感性。結(jié)果流式細(xì)胞術(shù)對急性髓系白血病患者的診斷敏感性為96.00%,特異性為36.00%;流式細(xì)胞術(shù)對急性淋巴白血病檢驗的敏感性為79.49%,特異性為41.03%。
所有患者中診斷結(jié)果中包括63例陽性和26例陰性患者,陽性復(fù)發(fā)率為82.54%,陰性復(fù)發(fā)率為23.08%,結(jié)果中可見陽性患者的復(fù)發(fā)率較陰性患者明顯更高,差異顯著(P<0.05)。結(jié)論將流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用于白血病患者外周血細(xì)胞檢測中,對于急性白血病患者的診斷有較好的敏感性,并且對于患者的復(fù)發(fā)率進行評估具有積極意義,是一種有效的評估方案,值得在臨床上推廣使用。
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