概述
二氟尼柳的化學(xué)名稱為5-(2,4-二氟苯基)水楊酸，又名氟苯水楊酸，是一種化學(xué)式為C13H8F2O3，分子量為250.198的有機(jī)化合物，純凈物性狀為白色固體。二氟尼柳是一種新型的水楊酸類非甾體抗炎，解熱，鎮(zhèn)痛藥物，國(guó)際非專有藥名為Diflunsial，該藥品已經(jīng)被美，英，法及日本等多國(guó)藥典收載，首先由美國(guó)默克公司開(kāi)發(fā)生產(chǎn)[1]。該物質(zhì)對(duì)輕度和中度疼痛具有止痛作用，能夠緩解關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等引起的疼痛，用法類似于阿司匹林，作用時(shí)間長(zhǎng)。
物理屬性
密度：1.437g/cm3
熔點(diǎn)：32-36°C
沸點(diǎn)：249°C（15 mmHg）
閃點(diǎn)：33°C
折射率：1.601
蒸汽壓：2.75E-07mmHg at 25°C
有關(guān)研究
常數(shù)測(cè)定
實(shí)驗(yàn)考察二氟尼柳在25℃、不同pH值條件下的平衡溶解度(S)、表觀油水分配系數(shù)Papp及解離常數(shù)(pKa)，為二氟尼柳新劑型的研究提供依據(jù)。采用紫外分光光度法測(cè)定二氟尼柳在水及pH值為4～9的磷酸鹽緩沖溶液中的平衡溶解度；采用搖瓶法測(cè)定二氟尼柳在正辛醇-水/pH值為4～9的磷酸鹽緩沖溶液中的表觀油水分配系數(shù)；采用紫外分光光度法測(cè)定二氟尼柳的解離常數(shù)。結(jié)果顯示，25℃時(shí)，二氟尼柳在水中的S值為0.034 47 mg/mL,lg Papp為1.34；在pH值為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的磷酸鹽緩沖液中，S值分別為0.055 04 mg/mL、0.225 30 mg/mL、0.555 60 mg/mL、1.520 00 mg/mL、2.558 00 mg/mL、2.671 00 mg/mL；相應(yīng)條件下的lg Papp為1.31、1.36、0.93、0.40、0.01、-0.03；解離常數(shù)pKa值為5.53。二氟尼柳的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)與溶液的pH值相關(guān)，隨著溶液pH值的升高，溶解度增大，油水分配系數(shù)減小，屬于生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)Ⅱ類藥物[2]。
生物活性研究
為探究二氟尼柳對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-231凋亡的影響及分子機(jī)制，采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度二氟尼柳對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)二氟尼柳對(duì)乳腺癌細(xì)胞克隆形成的作用；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移情況；吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色法(AO-EB)分析細(xì)胞凋亡情況；采用Western blot(WB)法檢測(cè)ILP-2、Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase-3的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，二氟尼柳顯著抑制MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞增殖，且抑制率與藥物濃度和時(shí)間呈正相關(guān)；平板克隆形成率降低；藥物顯著抑制細(xì)胞的遷移能力；細(xì)胞凋亡的數(shù)量增加，凋亡率呈藥物濃度依賴性趨勢(shì)； Cleaved-caspase-3、促凋亡蛋白Bax表達(dá)量上調(diào)，凋亡抑制蛋白ILP-2及抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)顯著下調(diào)，且呈藥物濃度依賴性。結(jié)果表明，二氟尼柳下調(diào)ILP-2蛋白表達(dá)影響B(tài)cl-2/Bax信號(hào)通路從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡[3]。
合成開(kāi)發(fā)
作為一種非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥，二氟尼柳臨床主要適用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、以及各種輕、中度疼痛。二氟尼柳其作用機(jī)制主要是通過(guò)作用于環(huán)氧化酶，從而抑制前列腺素的合成。該物質(zhì)是目前市場(chǎng)上十分具有發(fā)展前景的新型非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥，因此二氟尼柳及其衍生物的合成研究意義重大。Suzuki偶聯(lián)法的合成路線簡(jiǎn)單、反應(yīng)條件溫和且收率高，是合成二氟尼柳的有效途徑。然而多數(shù)鈀催化劑難以回收重復(fù)使用，使得生產(chǎn)成本較高，不利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。因此，開(kāi)發(fā)可回收的鈀催化劑及非貴金屬催化,實(shí)現(xiàn)二氟尼柳的高效合成具有重要的研究?jī)r(jià)值[4]。
以5-溴水楊酸和2,4-二氟苯硼酸為原料，1 mol%新型結(jié)構(gòu)鈀配合物[(NH2CH2COOH)2PdCl2]為催化劑，純水為溶劑，碳酸鉀為堿，經(jīng)Suzuki交叉偶聯(lián)反應(yīng)在25℃反應(yīng)6h可一步合成原料藥二氟尼柳，分離產(chǎn)率高達(dá)90%，粗產(chǎn)品通過(guò)簡(jiǎn)單的重結(jié)晶處理后，純度高達(dá)99.1%(HPLC)。反應(yīng)中所使用的催化劑易于合成、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、性質(zhì)穩(wěn)定、催化效率高。該Suzuki交叉偶聯(lián)反應(yīng)步驟少、操作簡(jiǎn)單、產(chǎn)品產(chǎn)率好、純度高，具有工業(yè)應(yīng)用前景[5]。
測(cè)定方法
實(shí)驗(yàn)建立二氟尼柳緩釋片中二氟尼柳含量測(cè)定的HPLC法。方法：C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5μm)，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水-冰醋酸(30:70:50:2)，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，流速為1.5 mL/min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果：二氟尼柳檢測(cè)濃度的線性范圍為7.5～52.5μg/mL(r=0.999 9)，平均回收率為99.93%，RSD=0.76%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確，可靠，重現(xiàn)性好，可用于二氟尼柳緩釋片中二氟尼柳的含量測(cè)定[6]。
參考文獻(xiàn)
[1]梁誠(chéng).二氟尼柳開(kāi)發(fā)前景廣闊[J].中國(guó)醫(yī)藥情報(bào), 2004, 10(1):2.
[2]溫莉珍,肖婷,何琳,等.二氟尼柳平衡溶解度、表觀油水分配系數(shù)及解離常數(shù)的測(cè)定[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2023,42(04):61-65.DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2023.066.
[3]彭航,向思琦,蔣雙艷,等.二氟尼柳調(diào)控ILP-2/Bcl-2/Bax信號(hào)通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡[J].中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào),2023,45(07):1038-1046.
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[5]劉世文,張苗,王臘生,等.Suzuki交叉偶聯(lián)法合成非甾體抗炎藥二氟尼柳[J].化學(xué)世界,2015,56(02):94-97.DOI:10.19500/j.cnki.0367-6358.2015.02.008.
[6]田甜,劉德孝.HPLC法測(cè)定二氟尼柳緩釋片中二氟尼柳含量[J].實(shí)用藥物與臨床, 2013, 16(2):2.DOI:10.3969/j.issn.1673-0070.2013.02.017.