嘌呤核苷磷酸化酶簡稱PNP，是嘌呤補(bǔ)救合成途徑的關(guān)鍵酶之一，廣泛存在于哺乳動物、寄生蟲和微生物中。按照嘌呤核苷磷酸化酶的蛋白結(jié)構(gòu)可分為兩類：低分子量的同源三聚體類和高分子量的同源六聚體類。其中哺乳動物和部分微生物(例如鼠傷寒沙門氏菌salmonellatyphimurium，嗜熱古菌芝田硫化葉菌Sulfolobus solfataricus等)的嘌呤核苷磷酸化酶屬于同源三聚體類，其分子量約為80～100kDa，每個亞基的分子量為30～32kDa，通常此類嘌呤核苷磷酸化酶只能以鳥嘌呤核苷和肌苷作為底物。而同源六聚體類的嘌呤核苷磷酸化酶，底物專一性不強(qiáng)，既可接受鳥嘌呤核苷和肌苷作為底物，也可以腺嘌呤核苷作為底物。其分子量約為150kDa，亞基分子量為25kDa左右。

應(yīng)用

由于嘌呤核苷磷酸化酶特殊的生物活性，使得其在醫(yī)藥領(lǐng)域得到了較大的應(yīng)用：①應(yīng)用于核苷類藥物的合成，大量研究表明，核苷類(核苷及其類似物)具有廣泛的抗腫瘤抗病毒的效果。②應(yīng)用于腫瘤靶向治療；③應(yīng)用于無機(jī)磷和ATPase酶活力等的定量測定。

制備方法

本發(fā)明的目的在于提供一種經(jīng)過分子改造并具有較高熱穩(wěn)定性的嘌呤核苷磷酸化酶，以及高產(chǎn)量的制備該嘌呤核苷磷酸化酶的方法。

本發(fā)明第一方面提供了一種突變的假交替單胞菌屬的嘌呤核苷磷酸化酶，與野生型的氨基酸序列相比，所述突變的嘌呤核苷磷酸化酶的氨基酸序列中第98位Asp突變?yōu)門yr。

在另一優(yōu)選例中，所述突變的嘌呤核苷磷酸化酶具有以下一種或多種特性：

(a)比酶活≥30U/mg，較佳地為≥45U/mg；

(b)儲存在堿性環(huán)境中；

(c)失活溫度≥60℃；

(d)在0－55℃，保存時間≥3h。

在另一優(yōu)選例中，所述突變的嘌呤核苷磷酸化酶的最適PH值為7.0-9.0，較佳地為7.5-8.5，更佳地為8.0。

本發(fā)明第二方面提供了一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸編碼第一方面所述突變的嘌呤核苷磷酸化酶。