背景及概述^[1]

T4RNALigase是以不依賴于模板的形式催化供體核酸的5'-磷?；┒撕褪荏w核酸的3'-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶活性依賴ATP，可作用于廣泛的底物，包括RNA，DNA，寡核糖核酸、寡脫氧核糖核酸和很多其它核酸衍生物。T4RNALigase2主要用于RNA5´末端加寡聚核酸用于映射和測序5´端，或用于cDNA合成(RACE)；用于3'-末端RNA標記；用于連接RNA和DNA；用于修飾或突變RNA。有研究為T3DNA連接酶和T4RNALigase2提供一種在RNA上m6A百分比含量的定量分析中的新應(yīng)用，首次發(fā)現(xiàn)T3DNA連接酶和T4RNALIGASE2對m6A敏感，與A相比，m6A可以抑制T3DNA連接酶和T4RNALIGASE2的連接活性，基于該特性，以RNA(含的A的RNA和含有m6A的RNA)為模板，建立了基于連接-聚合酶鏈式反應(yīng)定量測定m6A百分比含量的方法。

該方法首先確定RNA上的待測位點(待測位點是腺嘌呤，可能含有部分N6甲基腺嘌呤，當待測位點是m6A時，連接酶T3DNA連接酶或T4RNALIGASE2的連接活性被抑制，左探針和右探針不會被連接；當待測位點是A時，連接酶會將左探針和右探針連接起來)，用相應(yīng)的標準曲線定量該待測位點A的含量，其次在該RNA的待測位點附近選擇一個不含m6A的A位點作為參比位點，用相應(yīng)的標準曲線定量該參比位點A的含量，然后用參比為點A的含量減去待測位點A的含量得到待測位點m6A的含量，用待測位點m6A的含量除以待測位點A和m6A的總和，即可得到該待測位點m6A的百分比含量。

主要參考資料

[1] CN201611020857.5 T3DNA連接酶和T4RNA連接酶2在檢測N⁶甲基腺嘌呤中的應(yīng)用