背景及概述^[1]

連接酶是一種能催化兩個不同或相同分子的兩端相連接的酶，此反應(yīng)與ATP分解反應(yīng)相偶聯(lián)。對于DNA損傷切除修復(fù)最后一步有連接功能的是DNA連接酶。該酶特異地催化兩條DNA單鏈片段相聯(lián)結(jié)，也就是將DNA聚合酶重新合成的DNA補(bǔ)片連接到切除了DNA損傷的缺口的兩端。DNA連接酶還在復(fù)制和重組等過程中出現(xiàn)斷裂時有連接作用。很可能該酶還能對誘變劑(化學(xué)斷裂劑和電離輻射)所產(chǎn)生的DNA鏈斷裂有直接的連接作用，只要斷端是5′-PO₄和3′-OH，而且兩斷端相近又易拉攏。所以DNA連接酶有時能一步完成DNA鏈斷裂的修復(fù)。對于DNA雙鏈斷裂，則似乎不是由DNA連接酶直接修復(fù)，而是先由RecA蛋白質(zhì)在DNA兩斷端之間形成細(xì)絲使兩端對準(zhǔn)。在某種情況下，DNA斷裂需要先由外切核酸酶形成一個空源，再由DNA聚合酶合成補(bǔ)片，然后才連接。

9N2.0DNA連接酶（又名9oNDNALigase）能夠催化磷酸二酯鍵的形成，使與同一互補(bǔ)靶DNA鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的5´-磷酸末端和3´-羥基末端通過磷酸二酯鍵相連。9N2.0DNA連接酶來源于極度耐熱的海底超嗜熱古菌（Thermococcussp.）9°N菌株中克隆的連接酶基因，在45℃-90℃范圍內(nèi)均有活性。該酶進(jìn)一步經(jīng)基因工程基因突變，使得耐受更高的溫度，在90℃孵育15min仍然保留50%以上的活性，因此其適用于：（1）高溫條件下，連接DNA鏈上的切刻位點；（2）與PCR反應(yīng)條件兼容可用連接酶檢測反應(yīng)；（2）連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，對等位基因進(jìn)行特異性檢測。9N2.0DNA連接酶主要在高溫條件下，連接DNA鏈上的切刻位點；與PCR反應(yīng)條件兼容可用連接酶檢測反應(yīng)；連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，對等位基因進(jìn)行特異性檢測。

主要參考資料

[1]衛(wèi)生學(xué)大辭典