背景及概述[1]

CRFK/貓腎細(xì)胞傳代建議：1：2~1：3傳代，2~3天換液1次，細(xì)胞質(zhì)檢情況：不含細(xì)菌、真菌、支原體等微生物污染。CRFK/貓腎細(xì)胞培養(yǎng)條件RPMI-1640+10%FBS+1%P/S；生長(zhǎng)條件為氣相：5%CO2、95%空氣；溫度：37℃；凍存條件為90%FBS+10%DMSO。CRFK/貓腎細(xì)胞細(xì)胞不含細(xì)菌、真菌、支原體等微生物污染。有試驗(yàn)研究對(duì)不同毒力水貂阿留申病毒(AMDV)在CRFK/貓腎細(xì)胞中的增殖規(guī)律及其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行比較研究。將標(biāo)準(zhǔn)毒株AMDV-G及分離到的野毒株AMDVDL124、AMDV-DL125、AMDV-QD2、AMDV-QD3、AMDV-ZJ3接種CRFK/貓腎細(xì)胞，應(yīng)用間接免疫熒光、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、TCID50測(cè)定技術(shù)研究病毒在細(xì)胞中的復(fù)制及表達(dá)情況，同時(shí)檢測(cè)病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡情況。

間接免疫熒光結(jié)果顯示，5株野毒株熒光著色趨勢(shì)差異不大，均在感染后12h出現(xiàn)熒光，隨感染時(shí)間延長(zhǎng)熒光增多，AMDV-G熒光出現(xiàn)時(shí)間比野毒株晚，但病毒感染后72h幾乎所有細(xì)胞均出現(xiàn)熒光；實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，基因組復(fù)制趨勢(shì)大致相同，AMDV-DL125感染后3h復(fù)制開(kāi)始，AMDV-G感染后24h復(fù)制才開(kāi)始并呈快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，但感染后72h均達(dá)到峰值。TCID50檢測(cè)結(jié)果表明，0～12h為病毒感染潛伏期，AMDV-G感染后60h達(dá)到峰值，野毒株均在感染后72h達(dá)到峰值，但是6株病毒均能在感染后48～72h維持較高的感染滴度，其后隨細(xì)胞崩解而降低。SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，野毒株感染細(xì)胞后2～12h誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡差異顯著，AMDV-G誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡差異明顯低于野毒株，但是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)間較野毒株長(zhǎng)，在感染后24h仍對(duì)細(xì)胞凋亡有較明顯的誘導(dǎo)作用，但是各病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡主要集中在2～12h。該結(jié)果為AMDV的培養(yǎng)、鑒定及致病機(jī)理研究提供一定參考。

主要參考資料

[1]不同毒力水貂阿留申病毒在貓腎細(xì)胞中的增殖特性及凋亡特性的比較研究