背景[1-7]
DNA免疫制備抗體服務(wù)是幫助膜蛋白、其他復(fù)雜蛋白定制抗體，以及早期的DNA疫苗研發(fā)的有力工具。這種創(chuàng)新的DNA免疫技術(shù)可直接在體內(nèi)產(chǎn)生抗原，無需在體外生產(chǎn)及純化蛋白抗原。此技術(shù)可以使目標(biāo)抗原在免疫宿主體內(nèi)表達(dá)翻譯，擁有接近天然狀態(tài)的翻譯后修飾，進(jìn)而刺激機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)有力的免疫反應(yīng)。DNA免疫是直接引起機(jī)體對(duì)外源蛋白免疫反應(yīng)的免疫技術(shù)之一。
與傳統(tǒng)免疫技術(shù)不同的是，DNA免疫技術(shù)，使抗原在體內(nèi)產(chǎn)生，節(jié)省了免疫原的生產(chǎn)（例如：多次跨膜蛋白的生產(chǎn)）和純化時(shí)間。此外，表達(dá)的蛋白能程度保持蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)和適宜的翻譯后修飾，這對(duì)于生產(chǎn)識(shí)別目標(biāo)抗原天然結(jié)構(gòu)的高親和力治療性抗體是非常重要的。
同時(shí)，這種免疫技術(shù)是生產(chǎn)膜蛋白或者其他難于產(chǎn)生抗體的抗原（例如：基因不明的未知蛋白，毒性蛋白，難溶性蛋白，穩(wěn)定性低的蛋白，含有二硫鍵的蛋白或者其他的大結(jié)構(gòu)域的蛋白）抗體最理想的方式。另外，DNA免疫被看做是DNA疫苗研發(fā)初期的一種新穎技術(shù)。
DNA immunization系統(tǒng)的其他優(yōu)勢(shì)：
1.僅需要in silico DNA序列
2.無需重組蛋白或多肽
3.強(qiáng)烈的抗體反應(yīng)
4.節(jié)省時(shí)間和勞動(dòng)力
5.生產(chǎn)高親和力抗體
應(yīng)用[8][9]
1.用于單克隆抗體開發(fā)中的研究進(jìn)展
DNA免疫是將編碼特異性抗原的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入動(dòng)物體內(nèi),特異性基因序列在動(dòng)物體內(nèi)得以表達(dá)并誘導(dǎo)產(chǎn)生其特異性抗體的一系列免疫應(yīng)答過程。目前,DNA免疫已成為多種保護(hù)性以及診斷性單克隆抗體研究和開發(fā)的主要技術(shù)手段,尤其對(duì)于在體外難以表達(dá)和純化的抗原,DNA免疫比傳統(tǒng)的蛋白免疫占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。DNA免疫在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)抗原及遞呈方式類似于病毒感染,既能產(chǎn)生體液免疫,又能產(chǎn)生細(xì)胞免疫,由此克服了傳統(tǒng)蛋白質(zhì)免疫方法的缺陷,為制備高質(zhì)量單克隆抗體提供了良好的技術(shù)平臺(tái)。
2. 用于蛋白多克隆抗體制備
在利用DNA免疫技術(shù)制備GATA1蛋白多克隆抗體實(shí)驗(yàn)中利用斑馬魚研究gata1基因在血液血管發(fā)育過程中的功能,通過反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)擴(kuò)增了斑馬魚gata1基因編碼區(qū)序列,構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pCAGGS-P7/gata1,采用質(zhì)粒DNA免疫技術(shù)的方法免疫了BALB/c小鼠,制備了斑馬魚GATA1蛋白多克隆抗體。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:構(gòu)建的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pCAGGS-P7/gata1 DNA具有良好的免疫原性,在免疫小鼠后所獲得的抗血清抗體效價(jià)達(dá)1∶500。Western blot和免疫熒光檢測(cè)表明,抗血清能特異型地識(shí)別GATA1蛋白。
參考文獻(xiàn)
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