背景[1-6]
羊多克隆抗體制備使用羊進(jìn)行免疫，收集血清后，或直接使用抗血清進(jìn)行檢測(cè)，或進(jìn)行純化獲取純化的抗體。多克隆抗體是由免疫的宿主通過(guò)不同來(lái)源（多克?。┑腂細(xì)胞分泌產(chǎn)生的抗體。一組多克隆抗體應(yīng)識(shí)別同一抗原，同時(shí)由于是多克隆，所以往往對(duì)同一抗原的多個(gè)不同表位進(jìn)行識(shí)別。多克隆抗體制備原理：抗原刺激機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。
一般而言，抗體按靶位點(diǎn)不同主要分為單克隆抗體和多克隆抗體，由多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結(jié)合的抗體就是多克隆抗體。多克隆抗體優(yōu)勢(shì)：制備成本比同物種來(lái)源的單克隆抗體低；制備周期較同物種來(lái)源的單克隆抗體短；可同時(shí)檢測(cè)同一抗原的多個(gè)表位；適用于免疫沉淀、ELISA等實(shí)驗(yàn)；更高的親合力（avidity）；抗原有兩個(gè)基本特性，即抗原性和免疫原性。
有抗原性的物質(zhì)不一定有免疫原性，所以由此引出半抗原和完全全抗原，半抗原必須經(jīng)過(guò)經(jīng)過(guò)一定的改造（偶聯(lián)蛋白載體BSA，OVA或者HSA等大分子物質(zhì)）方能成為完全。一般而言完全抗原分子量越大（大于10KDa），結(jié)構(gòu)越復(fù)雜引起免疫反應(yīng)的能力也就越強(qiáng)?？贵w就是能與特異性抗原結(jié)合的免疫球蛋白，抗體一般分為多克隆抗體和單克隆抗體，多克隆抗體能與抗原的多個(gè)表位結(jié)合。
多抗一般制備流程：完全抗原的準(zhǔn)備→兔子的免疫→效價(jià)檢測(cè)和終放→抗體親和純化→抗體的濃縮和保存。
應(yīng)用[7][8]
羊多克隆抗體制備可用于小分子、多肽、修飾多肽、蛋白、融合蛋白、修飾蛋白的雜交細(xì)胞種類(lèi)及效價(jià)檢測(cè)：
在山羊c-Myc基因的原核表達(dá)及多克隆抗體和單克隆抗體的制備的實(shí)驗(yàn)中需要羊抗c-Myc蛋白的多克隆抗體以便用于間接ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞。c-Myc是一種重要的原癌基因,它可以作為一種轉(zhuǎn)錄因子,在維持胚胎干細(xì)胞的生物學(xué)特性和誘導(dǎo)多性干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,iPS)形成的過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。因此制備其相應(yīng)的多克隆抗體和單克隆抗體非常必要,實(shí)驗(yàn)采用間接ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞,應(yīng)用有限稀釋法對(duì)其進(jìn)行3-4次亞克隆,獲得穩(wěn)定分泌抗c-Myc蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
參考文獻(xiàn)
[1]Sirt1 deacetylates c-Myc and promotes c-Myc/Max association[J].Beibei Mao,Guowei Zhao,Xiang Lv,Hou-Zao Chen,Zheng Xue,Ben Yang,De-Pei Liu,Chih-Chuan Liang.International Journal of Biochemistry and Cell Biology.2011(11)
[2]Telomeres Acquire Embryonic Stem Cell Characteristics in Induced Pluripotent Stem Cells[J].Rosa M.Marion,Katerina Strati,Han Li,Agueda Tejera,Stefan Schoeftner,Sagrario Ortega,Manuel Serrano,Maria A.Blasco.Cell Stem Cell.2009(2)
[3]Hematopoietic Stem Cell Function and Survival Depend on c-Myc and N-Myc Activity[J].Elisa Laurenti,Barbara Varnum-Finney,Anne Wilson,Isabel Ferrero,William E.Blanco-Bose,Armin Ehninger,Paul S.Knoepfler,Pei-Feng Cheng,H.Robson MacDonald,Robert N.Eisenman,Irwin D.Bernstein,Andreas Trumpp.Cell Stem Cell.2008(6)
[4]Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Adult Rhesus Monkey Fibroblasts[J].Haisong Liu,Fangfang Zhu,Jun Yong,Pengbo Zhang,Pingping Hou,Honggang Li,Wei Jiang,Jun Cai,Meng Liu,Kai Cui,Xiuxia Qu,Tingting Xiang,Danyu Lu,Xiaochun Chi,Ge Gao,Weizhi Ji,Mingxiao Ding,Hongkui Deng.Cell Stem Cell.2008(6)
[5]Why Myc?An Unexpected Ingredient in the Stem Cell Cocktail[J].Paul S.Knoepfler.Cell Stem Cell.2008(1)
[6]An Extended Transcriptional Network for Pluripotency of Embryonic Stem Cells[J].Jonghwan Kim,Jianlin Chu,Xiaohua Shen,Jianlong Wang,Stuart H.Orkin.Cell.2008(6)
[7]Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors[J].Kazutoshi Takahashi,Koji Tanabe,Mari Ohnuki,Megumi Narita,Tomoko Ichisaka,Kiichiro Tomoda,Shinya Yamanaka.Cell.2007(5)
[8]張昀.山羊c-Myc基因的原核表達(dá)及多克隆抗體和單克隆抗體的制備[D].廣西大學(xué),2012.