背景[1-3]
棕蜱通用PCR試劑盒是一種用于檢測棕蜱的PCR試劑盒。棕蜱是一種常見的寄生蟲,可以傳播多種疾病,如萊姆病、斑疹傷寒等。該試劑盒包含以下主要成分:
PCR反應(yīng)液:包含聚合酶、dNTPs、引物等,用于擴(kuò)增棕蜱的DNA。
陽性對照:含有已知的棕蜱DNA,用于驗(yàn)證試劑盒的準(zhǔn)確性和可靠性。
陰性對照:不含棕蜱DNA,用于排除假陽性結(jié)果。
樣品處理液:用于提取和處理樣品中的DNA。
緩沖液:用于調(diào)節(jié)PCR反應(yīng)液的pH值和離子強(qiáng)度。
其他輔助試劑:如Tris-HCl、EDTA、BSA等,用于調(diào)節(jié)反應(yīng)條件和提高反應(yīng)效率。
使用棕蜱通用PCR試劑盒時,首先需要提取樣品中的DNA,然后將其加入到PCR反應(yīng)液中進(jìn)行擴(kuò)增。通過檢測擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性,可以確定樣品中是否存在棕蜱的DNA。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡便等優(yōu)點(diǎn),適用于臨床實(shí)驗(yàn)室和研究機(jī)構(gòu)對棕蜱的快速檢測和鑒定。
棕蜱通用PCR試劑盒
棕蜱通用PCR試劑盒的操作步驟如下:
1.樣本采集:從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本,并將其保存在無菌容器中。
2.DNA提取:將采集到的樣本進(jìn)行DNA提取,通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。
3.PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備:根據(jù)棕蜱通用PCR試劑盒說明書的要求,配制PCR反應(yīng)體系,包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。
4.PCR反應(yīng):將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中,進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時間根據(jù)試劑盒說明書的要求進(jìn)行設(shè)置。
5.結(jié)果分析:將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號檢測,根據(jù)熒光信號的出現(xiàn)情況判斷是否存在棕蜱的感染。
應(yīng)用[4][5]
棕蜱通用PCR試劑盒可以用于森林革蜱和草原革蜱PCR-RFLP鑒別方法的建立及線粒體基因組序列分析
是建立一種森林革蜱和草原革蜱的分子鑒定方法,即以核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列為基礎(chǔ)建立森林革蜱和草原革蜱的PCR-RFLP方法。通過提取森林革蜱和草原革蜱的基因組DNA,設(shè)計(jì)引物,棕蜱通用PCR試劑盒PCR擴(kuò)增和測序,最終獲得準(zhǔn)確的森林革蜱和草原革蜱的ITS2序列,并運(yùn)用DNAStar軟件對所得序列的限制性片段長度多態(tài)性進(jìn)行分析。研究發(fā)現(xiàn),森林革蜱和草原革蜱ITS2的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Spe I酶切后所得片段明顯不同,森林革蜱ITS2 PCR產(chǎn)物不能被切開而草原革蜱則被切成兩段??梢?運(yùn)用PCR-RFLP方法可成功鑒別森林革蜱和草原革蜱。目前關(guān)于革蜱的研究主要局限于形態(tài)學(xué)、流行病學(xué)、綜合防治及蜱傳疾病等方面,而關(guān)于線粒體基因組方面的研究很少。
擴(kuò)增森林革蜱線粒體的全基因組序列并對其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行分析,探討革蜱屬的進(jìn)化分類關(guān)系。棕蜱通用PCR試劑盒結(jié)果顯示,森林革蜱線粒體基因組全長為14945 bp,由13個蛋白質(zhì)編碼基因、2個非編碼區(qū)、22個t RNA和2個核糖體RNA構(gòu)成,各基因排列順序與后溝類硬蜱相似。森林革蜱整個線粒體基因組核苷酸組成為A=38.89%,T=39.89%,G=8.94%,C=12.29%,A+T含量為78.78%。在森林革蜱的線粒體基因組t RNA-Glu和nad1之間存在一個插入基因,長度為127bp,含有3個重復(fù)序列“similar to nad1”。運(yùn)用BI、ML和MP三種方法分別以森林革蜱線粒體基因組的13個蛋白質(zhì)編碼基因?yàn)闃?biāo)記構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種建樹方法所得結(jié)果一致或相似,即進(jìn)化樹分為兩大分支,后溝類硬蜱和前溝類硬蜱各形成一個分支,森林革蜱位于后溝類硬蜱分支上。在后溝類這一分支中,革蜱屬、扇頭蜱屬和凹溝蜱屬均形成單一分支,而花蜱屬和血蜱屬形成復(fù)分支。革蜱屬與扇頭蜱屬親緣關(guān)系較其它蜱屬近。
參考文獻(xiàn)
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