背景[1-3]
MV3人黑色素瘤細胞系是一種來源于人類黑色素瘤的細胞系。黑色素瘤是一種惡性皮膚腫瘤，起源于皮膚中的黑色素細胞。MV3人黑色素瘤細胞系是實驗室中常用的研究工具，用于研究黑色素瘤的生物學特性、藥物篩選和疫苗開發(fā)等領(lǐng)域。
MV3人黑色素瘤細胞系具有以下特點：
高度增殖：MV3人黑色素瘤細胞系在體外培養(yǎng)條件下具有較高的增殖能力，可以快速擴增。
多形性：MV3人黑色素瘤細胞系具有多種形態(tài)，包括梭形、多角形和不規(guī)則形狀等。
高侵襲性：MV3人黑色素瘤細胞系具有較強的侵襲能力，可以在體外模擬黑色素瘤的侵襲過程。
高轉(zhuǎn)移性：MV3人黑色素瘤細胞系具有較高的轉(zhuǎn)移能力，可以在體內(nèi)模擬黑色素瘤的轉(zhuǎn)移過程。
易于培養(yǎng)：MV3人黑色素瘤細胞系在體外培養(yǎng)條件下生長良好，易于操作和觀察。
基因穩(wěn)定性：MV3人黑色素瘤細胞系具有較好的基因穩(wěn)定性，可以保持穩(wěn)定的生物學特性。
適用于多種實驗方法：MV3人黑色素瘤細胞系適用于多種實驗方法，如免疫熒光染色、流式細胞術(shù)、蛋白質(zhì)組學分析等。
MV3人黑色素瘤細胞系
MV3人黑色素瘤細胞系培養(yǎng)操作
1)復蘇MV3人黑色素瘤細胞系：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)MV3人黑色素瘤細胞系傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)MV3人黑色素瘤細胞系凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
應用[4][5]
MV3人黑色素瘤細胞系可以用于泛素連接酶Cbl-b對皮膚黑素瘤增殖、凋亡、侵襲能力的影響及其作用機制初步研究
泛素連接酶Cbl-b在皮膚黑素瘤組織和細胞系中的表達及意義目的:探討泛素連接酶Cbl-b在黑素瘤細胞系A375、M14、MV3人黑色素瘤細胞系和黑素瘤組織中表達情況,并分析其與黑素瘤臨床病理特征的相關(guān)性。
方法:通過免疫組織化學方法檢測Cbl-b蛋白在69例皮膚黑素瘤組織及30例色素痣表達,并分析其與皮膚黑素瘤臨床病理特征相關(guān)性。QPCR、細胞免疫熒光、Western blot檢測Cbl-b在黑素瘤細胞系A375、M14、MV3人黑色素瘤細胞系及黑素細胞中mRNA及蛋白水平。
結(jié)果:免疫組化發(fā)現(xiàn)Cbl-b在69例皮膚黑素瘤和30例色素痣中分別有52例(75.36%)和4例陽性(13.33%),兩組差異有統(tǒng)計學意義(x2=32.745,p<0.01)。Cbl-b表達與皮膚黑素瘤相關(guān)預后因素,如腫瘤進展、Clark分級和Breslow厚度呈顯著正相關(guān)(rs=0.569;rs=0.654;rs=0.727,p值均<0.01)。潰瘍組Cbl-b表達顯著高于非潰瘍組(p<0.01)。QPCR示Cbl-b在黑素細胞及黑素瘤細胞株A375、M14、MV3人黑色素瘤細胞系mRNA表達差異有統(tǒng)計學意義(F=176.537,p<0.01)。細胞免疫熒光、免疫印跡法檢測發(fā)現(xiàn)皮膚黑素瘤細胞株Cbl-b表達均高于正常黑素細胞,以A375表達水平最高。結(jié)論:皮膚黑素瘤和其細胞株均高表達Cbl-b蛋白,說明Cbl-b可能在皮膚黑素瘤發(fā)病過程中起正性調(diào)控作用。
參考文獻
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[5]王小坡.泛素連接酶Cbl-b對皮膚黑素瘤增殖、凋亡、侵襲能力的影響及其作用機制初步研究[D].北京協(xié)和醫(yī)學院,2017.