背景^[1-3]

MV3人黑色素瘤細(xì)胞系是一種來(lái)源于人類黑色素瘤的細(xì)胞系。黑色素瘤是一種惡性皮膚腫瘤，起源于皮膚中的黑色素細(xì)胞。MV3人黑色素瘤細(xì)胞系是實(shí)驗(yàn)室中常用的研究工具，用于研究黑色素瘤的生物學(xué)特性、藥物篩選和疫苗開發(fā)等領(lǐng)域。

MV3人黑色素瘤細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：

高度增殖：MV3人黑色素瘤細(xì)胞系在體外培養(yǎng)條件下具有較高的增殖能力，可以快速擴(kuò)增。

多形性：MV3人黑色素瘤細(xì)胞系具有多種形態(tài)，包括梭形、多角形和不規(guī)則形狀等。

高侵襲性：MV3人黑色素瘤細(xì)胞系具有較強(qiáng)的侵襲能力，可以在體外模擬黑色素瘤的侵襲過(guò)程。

高轉(zhuǎn)移性：MV3人黑色素瘤細(xì)胞系具有較高的轉(zhuǎn)移能力，可以在體內(nèi)模擬黑色素瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程。

易于培養(yǎng)：MV3人黑色素瘤細(xì)胞系在體外培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)良好，易于操作和觀察。

基因穩(wěn)定性：MV3人黑色素瘤細(xì)胞系具有較好的基因穩(wěn)定性，可以保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性。

適用于多種實(shí)驗(yàn)方法：MV3人黑色素瘤細(xì)胞系適用于多種實(shí)驗(yàn)方法，如免疫熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)組學(xué)分析等。

MV3人黑色素瘤細(xì)胞系

MV3人黑色素瘤細(xì)胞系培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇MV3人黑色素瘤細(xì)胞系：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)MV3人黑色素瘤細(xì)胞系傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)MV3人黑色素瘤細(xì)胞系凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4][5]

MV3人黑色素瘤細(xì)胞系可以用于泛素連接酶Cbl-b對(duì)皮膚黑素瘤增殖、凋亡、侵襲能力的影響及其作用機(jī)制初步研究

泛素連接酶Cbl-b在皮膚黑素瘤組織和細(xì)胞系中的表達(dá)及意義目的:探討泛素連接酶Cbl-b在黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375、M14、MV3人黑色素瘤細(xì)胞系和黑素瘤組織中表達(dá)情況,并分析其與黑素瘤臨床病理特征的相關(guān)性。

方法:通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Cbl-b蛋白在69例皮膚黑素瘤組織及30例色素痣表達(dá),并分析其與皮膚黑素瘤臨床病理特征相關(guān)性。QPCR、細(xì)胞免疫熒光、Western blot檢測(cè)Cbl-b在黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375、M14、MV3人黑色素瘤細(xì)胞系及黑素細(xì)胞中mRNA及蛋白水平。

結(jié)果:免疫組化發(fā)現(xiàn)Cbl-b在69例皮膚黑素瘤和30例色素痣中分別有52例(75.36%)和4例陽(yáng)性(13.33%),兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=32.745,p<0.01)。Cbl-b表達(dá)與皮膚黑素瘤相關(guān)預(yù)后因素,如腫瘤進(jìn)展、Clark分級(jí)和Breslow厚度呈顯著正相關(guān)(rs=0.569;rs=0.654;rs=0.727,p值均<0.01)。潰瘍組Cbl-b表達(dá)顯著高于非潰瘍組(p<0.01)。QPCR示Cbl-b在黑素細(xì)胞及黑素瘤細(xì)胞株A375、M14、MV3人黑色素瘤細(xì)胞系mRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=176.537,p<0.01)。細(xì)胞免疫熒光、免疫印跡法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)皮膚黑素瘤細(xì)胞株Cbl-b表達(dá)均高于正常黑素細(xì)胞,以A375表達(dá)水平最高。結(jié)論:皮膚黑素瘤和其細(xì)胞株均高表達(dá)Cbl-b蛋白,說(shuō)明Cbl-b可能在皮膚黑素瘤發(fā)病過(guò)程中起正性調(diào)控作用。

參考文獻(xiàn)

[1]PI3K Pathway Inhibition Achieves Potent Antitumor Activity in Melanoma Brain Metastases In Vitro and In Vivo[J].Heike Niessner;;Jennifer Schmitz;;Ghazaleh Tabatabai;;Andreas M.Schmid;;Carsten Calaminus;;Tobias Sinnberg;;Benjamin Weide;;Thomas K.Eigentler;;Claus Garbe;;Birgit Schittek;;Leticia Quintanilla-Fend;;Benjamin Bender;;Marion Mai;;Christian Praetorius;;Stefan Beissert;;Gabriele Schackert;;Michael H.Muders;;Matthias Meinhardt;;Gustavo B.Baretton;;Reinhard Dummer;;Keith Flaherty;;Bernd J.Pichler;;Dagmar Kulms;;Dana Westphal;;Friedegund Meier.Clinical Cancer Research,2016(23)

[2]Cul1 promotes melanoma cell proliferation by promoting DEPTOR degradationand enhancing cap-dependent translation[J].Lan Chen;;Tianyu Liu;;Yunhua Tu;;Dongyun Rong;;Yu Cao.Oncology Reports,2016(2)

[3]Cbl?b promotes cell detachment via ubiquitination of focal adhesionkinase[J].Yibo Fan;;Xiujuan Qu;;Yanju Ma;;Yunpeng Liu;;Xuejun Hu.Oncology Letters,2016(2)

[4]Integrated genomic and transcriptomic analysis of human brain metastases identifies alterations of potential clinical significance[J].Jodi M Saunus;;Michael CJ Quinn;;Ann‐Marie Patch;;John V Pearson;;Peter J Bailey;;Katia Nones;;Amy E McCart Reed;;David Miller;;Peter J Wilson;;Fares Al‐Ejeh;;Mythily Mariasegaram;;Queenie Lau;;Teresa Withers;;Rosalind L Jeffree;;Lynne E Reid;;Leonard Da Silva;;Admire Matsika;;Colleen M Niland;;Margaret C Cummings;;Timothy JC Bruxner;;Angelika N Christ;;Ivon Harliwong;;Senel Idrisoglu;;Suzanne Manning;;Craig Nourse;;Ehsan Nourbakhsh;;Shivangi Wani;;Matthew J Anderson;;J Lynn Fink;;Oliver Holmes;;Stephen Kaz.J.Pathol.,2015(3)

[5]王小坡.泛素連接酶Cbl-b對(duì)皮膚黑素瘤增殖、凋亡、侵襲能力的影響及其作用機(jī)制初步研究[D].北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2017.