背景^[1-3]

小鼠晶狀體上皮細(xì)胞是晶狀體中最重要的細(xì)胞類型之一，主要負(fù)責(zé)晶狀體的生長、分化和代謝。晶狀體是眼睛中的一種透明結(jié)構(gòu)，位于虹膜和視網(wǎng)膜之間，負(fù)責(zé)將光線聚焦到視網(wǎng)膜上，從而形成清晰的視覺圖像。

小鼠晶狀體上皮細(xì)胞具有以下特點(diǎn)：

高度分化：小鼠晶狀體上皮細(xì)胞在發(fā)育過程中會經(jīng)歷多次有絲分裂和分化，最終形成成熟的晶狀體細(xì)胞。這些細(xì)胞具有高度分化的特性，包括特定的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能。

透明度：小鼠晶狀體上皮細(xì)胞具有高度透明的特性，這使得晶狀體能夠透過光線，保持眼睛的透明度。

代謝活躍：小鼠晶狀體上皮細(xì)胞具有較高的代謝活性，需要不斷地合成和分解蛋白質(zhì)、脂肪和糖類等物質(zhì)，以維持晶狀體的正常功能。

易受損傷：由于小鼠晶狀體上皮細(xì)胞的高度分化和代謝活躍，它們對外界環(huán)境和內(nèi)部因素的變化非常敏感。例如，紫外線、氧化應(yīng)激、營養(yǎng)不良等因素都可能導(dǎo)致小鼠晶狀體上皮細(xì)胞的損傷和死亡。

參與白內(nèi)障的發(fā)生：小鼠晶狀體上皮細(xì)胞在白內(nèi)障的發(fā)生中起著重要作用。白內(nèi)障是一種常見的眼病，主要表現(xiàn)為晶狀體的混濁和視力下降。研究表明，小鼠晶狀體上皮細(xì)胞的損傷和死亡是導(dǎo)致白內(nèi)障發(fā)生的重要原因之一。

小鼠晶狀體上皮細(xì)胞

小鼠晶狀體上皮細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇小鼠晶狀體上皮細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)小鼠晶狀體上皮細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)小鼠晶狀體上皮細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4][5]

小鼠晶狀體上皮細(xì)胞可以用于小鼠眼球發(fā)育及神經(jīng)酰胺作用機(jī)制的研究

探討角膜細(xì)胞的增殖與凋亡對角膜結(jié)構(gòu)修復(fù)與塑形的作用；探討晶狀體細(xì)胞增殖對晶狀體發(fā)生的作用及其與細(xì)胞周期之間的關(guān)系，研究Synaptophysin蛋白在晶狀體發(fā)生過程中的作用；探討視網(wǎng)膜細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期之間的關(guān)系，以及視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞分化和突觸連接形成對感光信息傳遞的作用；探討神經(jīng)酰胺堆積對視網(wǎng)膜發(fā)育的影響。

方法：應(yīng)用HE染色、免疫熒光和BrdU技術(shù)等技術(shù)對胚胎和出生后小鼠角膜、小鼠晶狀體上皮細(xì)胞、視網(wǎng)膜進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，對視網(wǎng)膜BrdU和CyclinD1陽性細(xì)胞密度進(jìn)行測量。

結(jié)果：1.小鼠角膜的發(fā)生與細(xì)胞凋亡胚胎發(fā)育及出生后早期，角膜以實(shí)質(zhì)層的發(fā)育為主。P14左右，角膜上皮細(xì)胞層開始增殖分化為兩層細(xì)胞，同時內(nèi)皮細(xì)胞也開始分化。至P30時，可以辨別出角膜的六層結(jié)構(gòu)。BrdU陽性細(xì)胞主要存在實(shí)質(zhì)層中成纖維細(xì)胞，出生以后也可見于角膜上皮細(xì)胞層和內(nèi)皮細(xì)胞層。隨著角膜發(fā)育，P10左右，其它層的BrdU陽性細(xì)胞都消失，僅存在于角膜上皮細(xì)胞層。PCNA陽性細(xì)胞在發(fā)育早期散在分布在角膜的各層，P14以后PCNA陽性細(xì)胞均勻的分布在角膜上皮細(xì)胞的基底層，并維持在穩(wěn)定狀態(tài)。在角膜發(fā)育早期，在各層可見許多細(xì)胞凋亡。

2.小鼠晶狀體上皮細(xì)胞發(fā)育過程中細(xì)胞增殖及Synaptophysin蛋白的表達(dá)E8左右，晶狀體由最初的晶狀體板分化而來，是由單層柱狀上皮細(xì)胞圍成的空泡，空泡再進(jìn)一步分化，被原始晶狀體纖維所替代，逐漸形成晶狀體；BrdU和PCNA的陽性細(xì)胞主要分布在晶狀體上皮細(xì)胞的前囊中央?yún)^(qū)，但P10以后BrdU陽性細(xì)胞已不在小鼠晶狀體上皮細(xì)胞分布，而PCNA持續(xù)表達(dá)。Cyclin D1陽性細(xì)胞在胚胎期主要在晶狀體上皮細(xì)胞的赤道部表達(dá)，出生早期在晶狀體上皮細(xì)胞的前囊中央?yún)^(qū)，P5以后在赤道前區(qū)分布，赤道部有少量陽性細(xì)胞；在小鼠晶狀體上皮細(xì)胞發(fā)育過程中，Synaptophysin可以在晶狀體的基質(zhì)中和赤道部的胞體中發(fā)現(xiàn)。

參考文獻(xiàn)

[1]Calcineurin and Electrical Remodeling in Pathologic Cardiac Hypertrophy[J].Hui-Bin Liu;;Bao-Feng Yang;;De-Li Dong.Trends in Cardiovascular Medicine,2010(5)

[2]Proliferative and cell fate effects of Hedgehog signaling in the vertebrate retina[J].Valerie A.Wallace.Brain Research,2007

[3]Sonic hedgehog promotes stem-cell potential of Müller glia in the mammalian retina[J].Jin Wan;;Hua Zheng;;Hong-Lei Xiao;;Zhen-Jue She;;Guo-Min Zhou.Biochemical and Biophysical Research Communications,2007(2)

[4]A General Role of Hedgehog in the Regulation of Proliferation[J].Michalis Agathocleous;;Morgane Locker;;William A.Harris;;Muriel Perron.Cell Cycle,2007(2)

[5]李雪.小鼠眼球發(fā)育及神經(jīng)酰胺作用機(jī)制的研究[D].河南大學(xué),2014.