背景^[1-3]

幼禽螺桿菌PCR試劑盒是一種用于檢測幼禽螺桿菌的PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))試劑盒。幼禽螺桿菌是一種常見的家禽腸道病原菌，可以引起禽類腹瀉、生長遲緩和生產(chǎn)性能下降等問題。

幼禽螺桿菌PCR試劑盒采用PCR技術(shù)，通過擴增幼禽螺桿菌的特異性DNA片段，從而實現(xiàn)對幼禽螺桿菌的快速、準確檢測。使用時，只需將樣品加入到試劑盒中，經(jīng)過一定的反應(yīng)時間和溫度循環(huán)后，即可得到檢測結(jié)果。

幼禽螺桿菌PCR試劑盒具有靈敏度高、特異性強、操作簡便等優(yōu)點，適用于家禽養(yǎng)殖場、獸醫(yī)實驗室等場所對幼禽螺桿菌進行快速檢測和診斷。

幼禽螺桿菌PCR試劑盒

幼禽螺桿菌PCR試劑盒的操作步驟如下：

1.樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。

2.DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。

3.PCR反應(yīng)體系準備：根據(jù)幼禽螺桿菌PCR試劑盒說明書的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時間根據(jù)試劑盒說明書的要求進行設(shè)置。

5.結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進行熒光信號檢測，根據(jù)熒光信號的出現(xiàn)情況判斷是否存在幼禽螺桿菌的感染。

應(yīng)用^[4][5]

幼禽螺桿菌PCR試劑盒可以用于肝螺桿菌對肝癌細胞侵襲能力的影響及分子機制的初步研究

肝螺桿菌作為腸肝螺桿菌中的一員,屬于與肝臟疾病有明確關(guān)系的五種肝螺桿菌(幼禽螺桿菌、肝螺桿菌、膽汁螺桿菌、膽囊螺桿菌、犬螺桿菌)之一。

利用幼禽螺桿菌PCR-PCR、DNA序列分析、免疫組化證實了人肝癌組織中確實存在螺桿菌感染,這充分說明螺桿菌能夠在人類肝組織中生存。肝螺桿菌因其誘導(dǎo)引起的肝臟損害的病理特征與人類慢性肝病在許多方面相似,使肝螺桿菌感染相關(guān)疾病的研究成為研究的熱點。以肝螺桿菌為研究因素,以人肝癌細胞株HEPG2和HCCLM3作為研究對象,采用Transwell侵襲實驗、Western-blot、幼禽螺桿菌PCR-RealtimePCR及siRNA干擾方法分析肝螺桿菌活菌對肝癌細胞侵襲能力的影響以及其相關(guān)因子基因及蛋白水平表達差異,探討其可能分子機制。

研究方法(1)肝螺桿菌對人肝癌細胞侵襲能力的影響：①分別以不同濃度的肝螺桿菌活菌作用于肝癌細胞HEPG2和HCCLM3,分為以下兩組,實驗組為不同濃度肝螺桿菌活菌(1×109CFU/ml、1×108CFU/ml、1×107CFU/ml、1x106CFU/ml)作用組,每組分別觀察12h、24h、48h、72h；另以僅加入無肝螺桿菌空白液體培養(yǎng)基為對照組。②通過Transwell實驗,檢測各組細胞不同時間點侵襲細胞數(shù)量,以此觀察濃度不同、時間不同情況下肝螺桿菌對肝癌細胞的侵襲能力的影響。并依此為根據(jù),確定后續(xù)實驗肝螺桿菌的最佳刺激濃度及刺激時間。

(2)肝螺桿菌誘導(dǎo)人肝癌細胞產(chǎn)生IL-8、TGF-β1、MMP-2和MMP-9的研究：①以第一部分確定的肝螺桿菌活菌最佳刺激濃度及最佳刺激時間,肝螺桿菌與肝癌細胞共孵育為實驗組,無肝螺桿菌空白液體培養(yǎng)基為對照組。②利用ELISA方法,檢測各組細胞所分泌的IL-8和TGF-β1的濃度變化。③采用Western Blot方法,檢測各組細胞內(nèi)MMP-2和MMP-9蛋白的表達水平,④通過幼禽螺桿菌PCR-realtime PCR實驗方法檢測各組細胞IL-8、TGF-β1、MMP-2和MMP-9 mRNA的表達。(3)肝螺桿菌通過影響TLR4/MyD88信號通路增強人肝癌細胞侵襲能力：①用Western Blot檢測各組細胞中TLR4、MyD88、TRIF蛋白的表達；②利用real time PCR在mRNA水平對各組細胞TLR4、MyD88、TRIF的表達進行驗證；

參考文獻

[1]Innate Immune Pattern Recognition:A Cell Biological Perspective[J].Sky W.Brubaker;;Kevin S.Bonham;;Ivan Zanoni;;Jonathan C.Kagan.Annual Review of Immunology,2015

[2]Innate Immune Recognition of Cancer[J].Seng-Ryong Woo;;Leticia Corrales;;Thomas F.Gajewski.Annual Review of Immunology,2015

[3]LPS promotes epithelial–mesenchymal transition and activation of TLR4/JNK signaling[J].Hangyu Li;;Yan Li;;Dan Liu;;Jingang Liu.Tumor Biology,2014(10)

[4]Elevated IL‐8,TNF‐α,and MCP‐1 in men with metastatic prostate cancer starting androgen‐deprivation therapy(ADT)are associated with shorter time to castration‐resistance and overall survival[J].Jaya Sharma;;Kathryn P.Gray;;Lauren C.Harshman;;Carolyn Evan;;Mari Nakabayashi;;Raina Fichorova;;Jennifer Rider;;Lorelei Mucci;;Philip W.Kantoff;;Christopher J.Sweeney.Prostate,2014(8)

[5]張春忙.肝螺桿菌對肝癌細胞侵襲能力的影響及分子機制的初步研究[D].南方醫(yī)科大學(xué),2016.