背景^[1-3]

斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒是一種用于檢測(cè)斑點(diǎn)氣單胞菌的分子診斷試劑盒。該試劑盒基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，通過(guò)特定的引物擴(kuò)增斑點(diǎn)氣單胞菌的DNA片段，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)該病原體的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)。

斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒具有以下特點(diǎn)：

高特異性和靈敏度：試劑盒采用一對(duì)特異性引物，能夠高特異地?cái)U(kuò)增斑點(diǎn)氣單胞菌的DNA片段，同時(shí)具有較高的靈敏度，能夠檢測(cè)低濃度的斑點(diǎn)氣單胞菌。

快速簡(jiǎn)便：該試劑盒操作簡(jiǎn)便，可在短時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)，大大提高了檢測(cè)效率。

多種規(guī)格和用途：不同品牌的斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒可能有不同的規(guī)格和用途，可用于科研、臨床診斷等多種領(lǐng)域。

在使用斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：

嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程的準(zhǔn)確性和可靠性。

注意實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和消毒，避免交叉污染。

對(duì)于陽(yáng)性結(jié)果，需要進(jìn)行復(fù)檢和確證實(shí)驗(yàn)，以排除假陽(yáng)性或污染的可能性。

對(duì)于臨床樣本的檢測(cè)，需要結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)和其他檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，避免誤診或漏診。

斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒

斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒的操作步驟如下：

1.樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無(wú)菌容器中。

2.DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M(jìn)行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。

3.PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備：根據(jù)斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時(shí)間根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行設(shè)置。

5.結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)，根據(jù)熒光信號(hào)的出現(xiàn)情況判斷是否存在斑點(diǎn)氣單胞菌的感染。

應(yīng)用^[4][5]

斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒可以用于大口黑鱸源維氏氣單胞菌的分離鑒定及其對(duì)宿主免疫應(yīng)答的影響

隨著大口黑鱸養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,在高溫季節(jié),各類病害問(wèn)題的頻繁發(fā)生已經(jīng)成為制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)因素,在高溫季節(jié)維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)引起的大口黑鱸暴發(fā)性死亡近幾年不斷發(fā)生,但目前對(duì)于大口黑鱸抗維氏氣單胞菌免疫機(jī)制了解甚少。

利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù),對(duì)高溫脅迫下大口黑鱸感染維氏氣單胞菌死亡率的差異進(jìn)行探究。此外,基于大口黑鱸全基因組與轉(zhuǎn)錄譜數(shù)據(jù),展開(kāi)大口黑鱸ASC基因的研究,分析其基因結(jié)構(gòu)與功能、預(yù)測(cè)蛋白結(jié)構(gòu)與功能、了解基因表達(dá)情況以及細(xì)胞定位,為深入開(kāi)展大口黑鱸抗菌機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

主要研究?jī)?nèi)容如下:大口黑鱸源維氏氣單胞菌的分離鑒定為查明2020年春季廣東省佛山市某養(yǎng)殖場(chǎng)人工養(yǎng)殖大口黑鱸魚(yú)苗出現(xiàn)暴發(fā)性死亡的病因,該研究對(duì)患病大口黑鱸魚(yú)苗肝臟組織中分離的一株細(xì)菌GZXR2020進(jìn)行了斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒分子鑒定,PCR擴(kuò)增獲得該菌株的16S rRNA基因和gyrB基因全長(zhǎng)序列,BLAST顯示其與維氏氣單胞菌的相應(yīng)序列高度同源,同源性分別高于99.5%和98.3%。根據(jù)VITEK2全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)45個(gè)理化項(xiàng)目的鑒定結(jié)果、羊血瓊脂平板溶血實(shí)驗(yàn)呈β-溶血的結(jié)果,進(jìn)一步通過(guò)毒力基因檢測(cè)并結(jié)合補(bǔ)充理化鑒定結(jié)果,可判斷此分離菌株為維氏氣單胞菌溫和生物型(A.veronii bv.sobria)。人工回歸感染實(shí)驗(yàn)采用低、中、高3種菌液濃度(3×107、1.5×108和3×108CFU·m L-1)進(jìn)行腹腔注射攻毒,可分別導(dǎo)致7%、40%和100%的死亡率,證實(shí)維氏氣單胞菌溫和生物型是引起此次大口黑鱸暴發(fā)性死亡的致病原。藥物敏感性實(shí)驗(yàn)顯示,在所檢測(cè)的17種抗菌藥物中,該菌株對(duì)大觀霉素、氟羅沙星、氟苯尼考等7種藥物敏感。

參考文獻(xiàn)

[1]Aeromonas spp.diversity in U.S.mid-Atlantic surface and reclaimed water,seasonal dynamics,virulence gene patterns and attachment to lettuce[J].Solaiman Sultana;Micallef Shirley A..Science of the Total Environment,2021

[2]Characterization and expression analysis of tandemly-replicated asc genes in the Japanese medaka,Oryzias latipes[J].Morimoto Natsuki;Okamura Yo;Kono Tomoya;Sakai Masahiro;Hikima Jun-ichi.Developmental and Comparative Immunology,2021

[3]Specific Evolution and Gene Family Expansion of Complement 3 and Regulatory Factor H in Fish[J].Najafpour Babak;Cardoso Jo?o C.R.;Canário Adelino V.M.;Power Deborah M..Frontiers in Immunology,2020

[4]Response of gut microbiota and immune function to hypoosmotic stress in the yellowfin seabream(Acanthopagrus latus)[J].Genmei Lin;;Min Zheng;;Shizhu Li;;Jingui Xie;;Wenyu Fang;;Dong Gao;;Jing Huang;;Jianguo Lu.Science of the Total Environment,2020

[5]楊超.大口黑鱸源維氏氣單胞菌的分離鑒定及其對(duì)宿主免疫應(yīng)答的影響[D].上海海洋大學(xué),2023.