背景[1-3]
化膿放線菌PCR試劑盒是一種用于檢測化膿放線菌的PCR試劑盒。該試劑盒包含多種引物和探針，可以同時擴增和檢測多個化膿放線菌的基因序列，從而提高檢測的準確性和靈敏度。
化膿放線菌PCR試劑盒利用聚合酶鏈式反應（PCR）技術，對疑似化膿放線菌感染的樣本進行快速、靈敏和特異的檢測。該試劑盒包含一系列必要的成分，如引物、酶、染料等，用于擴增化膿放線菌的特異性基因片段，從而實現(xiàn)對目標病原體的快速鑒定和檢測。
化膿放線菌PCR試劑盒的主要用途包括：
快速檢測：該試劑盒可以快速、準確地檢測出化膿放線菌的存在，有助于臨床醫(yī)生及時診斷和治療。
高通量檢測：該試劑盒可以同時擴增和檢測多個化膿放線菌的基因序列，適用于大規(guī)模樣本的檢測。
靈敏度高：該試劑盒具有較高的靈敏度，可以檢測到極低濃度的化膿放線菌DNA。
特異性強：該試劑盒具有較強的特異性，可以區(qū)分不同的化膿放線菌種類。
總之，化膿放線菌PCR試劑盒是一種非常有用的工具，可以幫助臨床醫(yī)生快速、準確地診斷和治療化膿放線菌感染。
化膿放線菌PCR試劑盒
化膿放線菌PCR試劑盒的操作步驟如下：
1.樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。
2.DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應保存在-20°C或更低的溫度下。
3.PCR反應體系準備：根據(jù)化膿放線菌PCR試劑盒說明書的要求，配制PCR反應體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。
4.PCR反應：將提取的DNA加入到PCR反應體系中，進行PCR反應。反應條件和時間根據(jù)試劑盒說明書的要求進行設置。
5.結(jié)果分析：將PCR反應后的產(chǎn)物進行熒光信號檢測，根據(jù)熒光信號的出現(xiàn)情況判斷是否存在化膿放線菌的感染。
應用[4-5]
化膿放線菌PCR試劑盒可以用于豬源化膿隱秘桿菌強、弱毒株全基因組測序及HSP100/Clp基因轉(zhuǎn)錄水平差異分析
化膿隱秘桿菌(Trueperella pyogenes)又名化膿放線菌或化膿棒狀桿菌?；撾[秘桿菌可通過侵染易感動物的黏膜和皮膚誘發(fā)化膿性炎癥,該菌也可與其他病原菌混合感染。建立的間接ELISA方法可用于調(diào)查豬群中化膿隱秘桿菌抗體情況,該方法可作為化膿隱秘桿菌抗體檢測的一種新手段。
本研究采用二代加三代測序技術分別對豬源化膿隱秘桿菌強、弱毒株進行全基因組測序,完成了豬源化膿隱秘桿菌強毒株(TP-2849;NZCP029004.1)與弱毒株(TP4479;NZCP029001.1)的基因島預測、致病菌毒力因子預測、抗生素抗性基因預測、COG注釋、KEGG注釋、GO注釋與基因組圈圖的繪制,以上結(jié)果填補了豬源化膿隱秘桿菌全基因組的相關數(shù)據(jù)。Virulence Factors Database(VFDB)數(shù)據(jù)庫預測結(jié)果中發(fā)現(xiàn),豬源化膿隱秘桿菌強、弱毒株中均存在5種HSP100/Clp基因。本研究以豬源化膿隱秘桿菌強毒株TP-2849與弱毒株TP4479對BABL/c小鼠進行攻毒試驗,以化膿放線菌PCR試劑盒實時熒光定量PCR檢測5種HSP100/Clp基因在BALB/c小鼠的7種臟器組織和血液中的表達量,結(jié)果顯示,豬源化膿隱秘桿菌強、弱毒株的5種HSP100/Clp基因表達量差異極顯著。繪制豬源化膿隱秘桿菌強、弱毒株生長曲線,化膿放線菌PCR試劑盒結(jié)果顯示,弱毒株的遲緩期長于強毒株;強毒株的穩(wěn)定期長于弱毒株的穩(wěn)定期。綜上所述,豬源化膿隱秘桿菌毒力的強弱及生長速率的快慢與5種HSP100/Clp基因轉(zhuǎn)錄水平表達量有著緊密的聯(lián)系。
參考文獻
[1]Replacing the 238th aspartic acid with an arginine impaired the oligomerization activity and inflammation-inducing property of pyolysin[J].Zhang;;Wang;;Wang;;Zhang;;Hu;;Ma;;Wang.Virulence,2018(1)
[2]A T4virus prevents biofilm formation by Trueperella pyogenes[J].Vinícius da Silva Duarte;;Roberto Sousa Dias;;Andrew M.Kropinski;;Andréda Silva Xavier;;Camila Geovana Ferro;;Pedro M.P.Vidigal;;Cynthia Canedo da Silva;;Sérgio Oliveira de Paula.Veterinary Microbiology,2018
[3]Trueperella pyogenes and Brucella abortus Coinfection in a Dog and a Cat on a Dairy Farm in Egypt with Recurrent Cases of Mastitis and Abortion[J].Gamal Wareth;;Mohamed El-Diasty;;Falk Melzer;;Jayaseelan Murugaiyan;;Amir Abdulmawjood;;Lisa D.Sprague;;Heinrich Neubauer;;Giuliano Bettini.Veterinary Medicine International,2018
[4]Virulence markers associated with Trueperella pyogenes infections in livestock and companion animals[J].R.M.Risseti;;E.Zastempowska;;M.Twaru?ek;;H.Lassa;;J.C.F.Pantoja;;A.P.C.de Vargas;;S.T.Guerra;;C.A.D.Bola?os;;C.L.de Paula;;A.C.Alves;;B.S.Colhado;;F.V.R.Portilho;;C.Tasca;;G.H.B.Lara;;M.G.Ribeiro.Letters in Applied Microbiology,2017(2)
[5]田佳琪.豬源化膿隱秘桿菌強、弱毒株全基因組測序及HSP100/Clp基因轉(zhuǎn)錄水平差異分析[D].吉林農(nóng)業(yè)大學,2020.