背景^[1-3]

巨球菌PCR試劑盒是一種用于檢測巨球菌的分子生物學(xué)檢測工具。它利用聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)來擴增巨球菌的DNA片段，從而對其進行檢測和鑒定。

巨球菌PCR試劑盒通常包含各種成分，如引物、DNA聚合酶、脫氧核糖核苷酸等。引物是用于引導(dǎo)DNA聚合酶合成特定DNA片段的短序列，而DNA聚合酶則是實現(xiàn)PCR擴增的關(guān)鍵酶。

使用巨球菌PCR試劑盒進行檢測時，需要將樣本中的DNA提取出來，然后與試劑盒中的引物和DNA聚合酶一起進行PCR擴增。擴增后的DNA片段可以通過凝膠電泳等方法進行檢測和鑒定。

巨球菌PCR試劑盒具有高特異性和靈敏度，能夠快速準確地檢測出巨球菌的存在。它對于食品安全、臨床診斷等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價值，可用于檢測食品中的巨球菌污染、臨床感染病例中的巨球菌等。

需要注意的是，使用巨球菌PCR試劑盒進行檢測時，應(yīng)遵循試劑盒的使用說明，確保操作的準確性和可靠性。同時，對于試劑盒的質(zhì)量和性能應(yīng)進行嚴格的控制和驗證，以確保檢測結(jié)果的準確性和可靠性。

巨球菌PCR試劑盒

巨球菌PCR試劑盒的操作步驟如下：

1.樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。

2.DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。

3.PCR反應(yīng)體系準備：根據(jù)巨球菌PCR試劑盒說明書的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時間根據(jù)試劑盒說明書的要求進行設(shè)置。

5.結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進行熒光信號檢測，根據(jù)熒光信號的出現(xiàn)情況判斷是否存在巨球菌的感染。

應(yīng)用^[4-5]

巨球菌PCR試劑盒可以用于16S rDNA高通量測序分析滴蟲性陰道炎患者陰道菌群多樣性

以滴蟲性陰道炎患者為研究對象,觀察該病狀態(tài)下的陰道微生態(tài)特征,并同時利用高通量測序技術(shù)分析滴蟲性陰道炎患者陰道微生物群落的組成與結(jié)構(gòu),以期為滴蟲性陰道炎的發(fā)病機制及其與陰道菌群的關(guān)系的進一步研究奠定基礎(chǔ)。

方法2016年3月至2016年9月于青島大學(xué)附屬青島市婦女兒童醫(yī)院、青島大學(xué)附屬青島市立醫(yī)院,嚴格按照疾病診斷和研究對象篩選標準,收集育齡期健康婦女和滴蟲性陰道炎患者陰道分泌物樣本,分別為對照組和滴蟲組。測定滴蟲組和對照組陰道分泌物p H值。利用革蘭染色陰道分泌物涂片比較兩組陰道分泌物菌群多樣性、乳酸桿菌密集度,評價兩組陰道微生態(tài)狀況。使用乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基分離培養(yǎng)滴蟲組和對照組陰道分泌物中乳酸桿菌并進行菌落計數(shù)。提取陰道細菌總基因組DNA,利用通用巨球菌PCR試劑盒引物分別擴增滴蟲組和對照組陰道細菌16S r DNA V3和V4高變區(qū)。巨球菌PCR試劑盒PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)Illumina-Misq高通量測序平臺測序,測序長度為450 bp。優(yōu)化處理序列數(shù)據(jù),以97%的相似性閾值劃分分類操作單元,進行生物信息學(xué)分析,比較兩組的菌屬構(gòu)成、Alpha多樣性、Beta多樣性,尋找組間差異物種。

巨球菌PCR試劑盒結(jié)果：滴蟲性陰道炎患者陰道分泌物pH值高于對照組,陰道菌群多樣性增加、乳酸桿菌密集度顯著降低、菌落計數(shù)顯著低于對照組。滴蟲組的陰道分泌物p H值為5.45±0.61,對照組為4.47±0.44,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001)。兩組分泌物中的乳酸桿菌含量存在較大差異,滴蟲組的陰道乳酸桿菌計數(shù)為3.83±2.50×106,對照組為16.11±5.24×106,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001)。Alpha多樣性分析,兩組的多樣性指數(shù)中OTU個數(shù)、Chao1指數(shù)、Simpson指數(shù)、Shannon指數(shù)沒有顯著差異(p>0.001),滴蟲感染時陰道菌群α多樣性無顯著變化。巨球菌PCR試劑盒及高通量測序分析發(fā)現(xiàn)兩組菌群構(gòu)成在屬水平存在顯著差異。兩組菌群組成差異菌屬包括纖毛菌屬、普雷沃菌屬、乳桿菌屬、支原體屬、阿波羅菌屬、巨球菌屬等。結(jié)論滴蟲性陰道炎患者陰道微環(huán)境中菌群多樣性增加,乳酸桿菌減少、雜菌增加。

參考文獻

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