背景^[1-3]

捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒是一種有效的捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲檢測(cè)工具，具有廣泛的應(yīng)用前景。通過使用該試劑盒，可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出動(dòng)物體內(nèi)的捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲，為臨床診斷和治療提供有力支持。

捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒是一種用于檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲的生物試劑盒，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。以下是該試劑盒的基本信息：

組成：捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒通常包括PCR反應(yīng)液、酶標(biāo)板、特異性引物等組成部分。

特點(diǎn)：該試劑盒具有高特異性、高靈敏度、快速檢測(cè)等特點(diǎn)。通過對(duì)捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲基因組特定片段進(jìn)行擴(kuò)增，可以有效區(qū)分捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲與其他線蟲。試劑盒的檢測(cè)限可達(dá)到10ng/ml左右，可檢測(cè)低濃度的蟲體。此外，試劑盒還采用了酶標(biāo)板等優(yōu)質(zhì)材料，確保了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。

用途：捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒適用于對(duì)動(dòng)物糞便、腸內(nèi)容物等樣本進(jìn)行捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲檢測(cè)。該試劑盒可廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域，為獸醫(yī)工作者、研究人員等提供有力的檢測(cè)工具。

使用方法：使用捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒時(shí)，需要按照說明書的步驟進(jìn)行操作。通常包括樣本處理、PCR擴(kuò)增、酶標(biāo)板檢測(cè)等環(huán)節(jié)。操作簡(jiǎn)便，一般人員經(jīng)過培訓(xùn)即可熟練掌握。

捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒

捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒的操作步驟如下：

1.樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。

2.DNA提取：將采集到的樣本進(jìn)行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。

3.PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備：根據(jù)捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒說明書的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時(shí)間根據(jù)試劑盒說明書的要求進(jìn)行設(shè)置。

5.結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)，根據(jù)熒光信號(hào)的出現(xiàn)情況判斷是否存在捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲的感染。

應(yīng)用^[4-5]

捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒可以用于羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ITS基因序列分析及其蟲卵PCR檢測(cè)方法的建立

捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Haemonchus contortus)是寄生于反芻動(dòng)物胃腸道的優(yōu)勢(shì)線蟲之一,宿主范圍廣泛,可以寄生于綿羊、山羊、牛、駱駝等反芻動(dòng)物,在一些感染嚴(yán)重的地區(qū),捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染率可高達(dá)100%,其主要以反芻動(dòng)物皺胃的毛細(xì)血管中的血液為食,嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致宿主死亡。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲在全球廣泛存在,由于其致病性和繁殖力強(qiáng)的特點(diǎn),在多個(gè)地區(qū)都造成了大范圍的流行,這給全球羊養(yǎng)殖業(yè)都帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)財(cái)產(chǎn)損失。因此,準(zhǔn)確診斷羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病對(duì)于該病有效防治以及保障羊的健康養(yǎng)殖具有重要意義。

本研究擬采用捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒PCR技術(shù),對(duì)陜西地區(qū)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲分離株的內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(internal transcribed spacer,ITS)基因序列進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序和分析,以了解ITS基因的遺傳變異情況;根據(jù)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ITS2基因特點(diǎn),設(shè)計(jì)特異性引物并對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化建立糞便蟲卵PCR檢測(cè)方法,將所建立捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒PCR應(yīng)用于臨床奶山羊糞便樣品中捻轉(zhuǎn)血矛線蟲卵的檢測(cè),并與糞便鏡檢結(jié)果進(jìn)行對(duì)比,獲得以下捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒結(jié)果:1.對(duì)采自陜西咸陽(yáng)地區(qū)不同年份的44株捻轉(zhuǎn)血矛線蟲分離株,進(jìn)行ITS基因位點(diǎn)的擴(kuò)增、測(cè)序和分析。

捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒結(jié)果顯示,捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ITS1的長(zhǎng)度為400或404 bp、種內(nèi)變異率為0.0～3.6%,共27個(gè)類型,將其與參考序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)存在16個(gè)堿基突變位點(diǎn),ITS2的長(zhǎng)度為231bp,種內(nèi)變異率為0.0～6.9%,共20個(gè)基因類型,與參考序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)共15個(gè)堿基突變位點(diǎn)。結(jié)果表明,陜西咸陽(yáng)地區(qū)2015—2020年之間的羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的ITS rDNA序列的種內(nèi)變異率較小,且尚未出現(xiàn)種群的分化。種系發(fā)育進(jìn)化樹結(jié)果顯示各國(guó)的分離株進(jìn)化關(guān)系較近,且同一地區(qū)的不同分離株未匯聚在同一枝,初步分析表明,捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的ITS基因的變異情況與不同的地理?xiàng)l件之間的相關(guān)性不明顯,世界各地的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲分離株之間存在較高的基因相似度。

2.基于特異性引物對(duì)(Hc.F、Hc.R)建立的捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒PCR檢測(cè)方法的特異性良好,能將捻轉(zhuǎn)血矛線蟲卵同其他常見線蟲卵(細(xì)頸線蟲、似血矛線蟲、蘭式毛尾線蟲、尖尾線蟲、網(wǎng)尾線蟲、夏伯特線蟲、蛇形毛圓線蟲、粗紋食道口線蟲、綿羊毛尾線蟲等)特異性區(qū)分。PCR反應(yīng)的最佳退火溫度為53℃。在DNA模板含量較低(0.298 pg)時(shí),仍能檢出,表明其具有較高的靈敏性。85份奶山羊糞便樣品,經(jīng)糞便鏡檢共檢出23份捻轉(zhuǎn)血矛線蟲陽(yáng)性糞樣(27.06%,23/85),利用特異性PCR鏡檢共檢出38份捻轉(zhuǎn)血矛線蟲陽(yáng)性糞樣(44.71%,38/85),且鏡檢和PCR方法診斷結(jié)果一致性一般(Kappa=0.530)。綜上所述,陜西咸陽(yáng)地區(qū)的羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的ITS rDNA基因序列的遺傳進(jìn)化程度較低。捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒所建立的分子生物學(xué)方法能準(zhǔn)確地將捻轉(zhuǎn)血矛線蟲卵從糞便樣品中檢測(cè)出,為臨床檢測(cè)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病提供了一種診斷方法。

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