背景^[1-3]

B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞是小鼠黑色素瘤細(xì)胞，是一種常用于黑色素瘤研究的細(xì)胞系。

黑色素瘤是一種高度惡性的腫瘤，起源于黑色素細(xì)胞。小鼠黑色素瘤細(xì)胞系B16BL6在實(shí)驗(yàn)研究中被廣泛用于黑色素瘤的模型建立和治療研究。這種細(xì)胞系具有侵襲性和轉(zhuǎn)移性，能夠形成黑色素瘤，并且可以通過免疫缺陷小鼠進(jìn)行接種。

有關(guān)B16BL6細(xì)胞系的研究已經(jīng)涉及到各種不同的領(lǐng)域，包括黑色素瘤的發(fā)病機(jī)制、腫瘤免疫、藥物篩選等。通過研究B16BL6細(xì)胞系，科學(xué)家們可以深入探討黑色素瘤的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)。

B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞

B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞可以用于山豆根對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-BL6生長(zhǎng)、增殖的影響

研究山豆根對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-BL6生長(zhǎng)、增殖的影響。

方法：培養(yǎng)小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-BL6并隨機(jī)分為對(duì)照組和處理組,對(duì)照組用不含藥物的RMPI1640培養(yǎng)基進(jìn)行處理,處理組分別采用含有400μg/ml、500μg/ml、600μg/ml、700μg/ml、800μg/ml山豆根提取物的RMPI1640培養(yǎng)基進(jìn)行處理。采用細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)、黏附實(shí)驗(yàn)、侵襲重組基底膜實(shí)驗(yàn)、趨化性運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)觀察山豆根提取物對(duì)B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。

結(jié)果：山豆根提取物終濃度為700、800μg/ml時(shí),B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖生長(zhǎng)OD值明顯低于對(duì)照組(t=2.526,4.371,P<0.05);山豆根提取物終濃度為500、600、700、800μg/ml時(shí),黏附能力OD值明顯低于對(duì)照組(t=4.856,8.515,8.926,12.357,P<0.05),侵襲細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組(t=4.661,9.824,12.460,16.300,P<0.05),趨化性運(yùn)動(dòng)細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組(t=2.698,3.906,6.012,7.974,P<0.05)。

結(jié)論：山豆根具有抑制B16BL6細(xì)胞系|小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移的能力,且與藥物劑量呈依賴性關(guān)系。

參考文獻(xiàn)

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[4]Para-Phenylenediamine Induces Apoptotic Death of Melanoma Cells and Reduces Melanoma Tumour Growth in Mice.Bhowmick Debajit;Bhar Kaushik;Mallick Sanjaya K.;Das Subhadip;Chatterjee Nabanita;Sarkar Tuhin Subhra;Chakrabarti Rajarshi;Das Saha Krishna;Siddhanta Anirban.Biochemistry Research International,2016.

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