背景^[1-7]

TRAP試劑盒(tagged RNA affinity purification)是一種檢測與RNA結(jié)合的蛋白質(zhì)（RBPs）或RNA的試劑盒。TRAP方法首先通過設(shè)計(jì)GST-MS2融合表達(dá)載體和ncRNA-MS2莖環(huán)結(jié)構(gòu)串聯(lián)重復(fù)載體，共轉(zhuǎn)細(xì)胞獲得GST-MS2融合蛋白和ncRNA-MS2融合RNA，在胞內(nèi)形成GST-MS2~ncRNA-MS2與蛋白或RNA的復(fù)合體，最后裂解細(xì)胞，利用谷胱甘肽親和瓊脂糖珠子進(jìn)行拉取，獲得目的蛋白-RNA復(fù)合物，進(jìn)一步分離純化獲得目的蛋白或目的RNA進(jìn)行下一步檢測分析。

抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于正常人肺泡巨噬細(xì)胞等部位的TRAP和存在于細(xì)胞白血病人脾臟TRAP均在細(xì)胞濾泡中，并不釋放入血液，血液中TRAP絕大部分來源于破骨細(xì)胞。因而測量血液中TRAP可以了解破骨細(xì)胞的功能狀態(tài)。在堿性的緩沖液中，細(xì)胞內(nèi)酸酸性磷酸酶催化底物水解，其生成物進(jìn)而與一種穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性的偶氮染料沉淀，當(dāng)?shù)孜镏写嬖诰剖釙r(shí)，該反應(yīng)只出現(xiàn)在特異性細(xì)胞中。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1、使用方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

注意事項(xiàng)：

1．TRAP檢測試劑盒（多種屬）實(shí)驗(yàn)操作簡便檢測前，檢查各種儀器，打開酶標(biāo)儀，穩(wěn)定20分鐘左右。

2．檢測樣本要澄清，不能含雜物，否則會直接影響結(jié)果。

3．實(shí)驗(yàn)開始前要將試劑盒取出，室溫放置30-40分鐘，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使檢測結(jié)果更為穩(wěn)定。

4．盡量做雙標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)，這樣可以保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

5．底物具有毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，要避免接觸。

6．TRAP檢測試劑盒（多種屬）實(shí)驗(yàn)操作簡便實(shí)驗(yàn)中，要使底物避光保存，酶標(biāo)板均可拆卸，多余的部分應(yīng)密封好，低溫保存。

結(jié)果判斷與分析：

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的待測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

TRAP試劑盒（多種種屬）優(yōu)點(diǎn)：

1．簡單操作、、靈敏度高、特異強(qiáng)；

2．穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于12%；

3．吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

4．TRAP試劑盒（多種種屬）實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性高，結(jié)果穩(wěn)定；

應(yīng)用^[8]

TRAP試劑盒可用于大腸桿菌表面展示Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性的實(shí)驗(yàn)

利用大腸桿菌Lpp’OmpA來表面展示S.aureus的TRAP蛋白,并研究其免疫原性,為探索新型奶牛乳房炎S.aureus疫苗提供參考。將重組大腸桿菌XL1-Blue/pLO、XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP蛋白用弗氏佐劑乳化后,分別免疫接種ICR小鼠,免疫后不同時(shí)間采取血清檢測TRAP特異性抗體水平和抗體亞類;利用ELISPOT檢測IL-4和IFN-γ、間接ELISA方法IL-17A;然后分別用S.aureus Newman和HLJ23-1菌株對免疫小鼠進(jìn)行攻毒。在采取血清檢測TRAP特異性抗體水平和抗體亞類時(shí)需要TRAP試劑盒。

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