背景^[1-3]

3%氯化鈉堿性蛋白胨水用于嗜鹽性細(xì)菌特別是副溶血性弧菌及弧菌的前增菌培養(yǎng)。3%氯化鈉堿性蛋白胨水檢驗(yàn)原理：蛋白胨提供碳源、氮源、維生素、生長因子；高含量氯化鈉和高pH值可以抑制非弧菌類細(xì)菌生長，不影響副溶血性弧菌生長。

3%氯化鈉堿性蛋白胨水

3%氯化鈉堿性蛋白胨水實(shí)驗(yàn)方法:

1.培養(yǎng)基陽性組:取稀釋后的各試驗(yàn)菌懸液1ml分別加于預(yù)先制備的試管培養(yǎng)基中,每種細(xì)菌接種兩支試管。同時(shí)分別取1ml菌懸液加于無菌空平皿中,用于計(jì)數(shù),每種細(xì)菌做兩個(gè)平板。

2.培養(yǎng)基陰性組:即空白對照,即不添加菌液。

3.接種量計(jì)數(shù):步驟1中的平皿中,細(xì)菌傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基,霉菌和白色念珠菌傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。同時(shí)每種培養(yǎng)基做1個(gè)空白。

4.培養(yǎng)條件:

無菌檢查:20~25℃培養(yǎng)14天或直至出現(xiàn)渾濁(不超過14天)

MPN計(jì)數(shù):30~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天

控制菌檢查:30~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24小時(shí)

傾注計(jì)數(shù)用的的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板置30~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天

傾注計(jì)數(shù)用的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板置20~25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~5天

應(yīng)用^[4][5]

3%氯化鈉堿性蛋白胨水可以用于3種致病性弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制

研究和建立致病性弧菌快速檢測的新技術(shù)和新方法受到各國研究機(jī)構(gòu)的重視。用選擇性鑒別培養(yǎng)基即可滿足抽檢率,更真實(shí)的反應(yīng)水產(chǎn)品的污染狀況,又能克服標(biāo)準(zhǔn)方法的費(fèi)時(shí)、繁瑣和成本較高等許多不足。

主要圍繞以下幾個(gè)方面開展了一些工作：1霍利斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制基于霍利斯弧菌的基礎(chǔ)營養(yǎng)和特殊生態(tài)環(huán)境需求,優(yōu)化了其增菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。通過單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面組合試驗(yàn)得到如下結(jié)果：培養(yǎng)基組成成分為混合蛋白胨2.11%(胰蛋白胨：魚蛋白胨為1：1)、酵母浸膏0.210%、NaCl2.13%、pH7.5；培養(yǎng)溫度為36土1℃。經(jīng)過8h增菌后,該培養(yǎng)基的菌液濃度是GB/T4789.7-2008中規(guī)定方法的堿性蛋白胨水(APW)增菌菌液濃度的1.39倍,增菌效果明顯。

以霍利斯弧菌特有的酶系統(tǒng)及其代謝特點(diǎn)和對某些特定抑菌成分的抵抗力為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)研制了霍利斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基(VhDM)。試驗(yàn)中對VhDM的顯色效果、平板效率、靈敏度和特異性進(jìn)行評價(jià)。

結(jié)果顯示：VhDM對霍利斯弧菌具有較好的選擇性和特異性；用VhDM在36±1℃培養(yǎng)16h-24h,霍利斯弧菌菌落為黃色；其它各種弧菌及非弧菌屬致病菌菌落呈紅色或未形成有效的可見菌落；VhDM對霍利斯弧菌的出菌效率與嗜鹽瓊脂相比為(90.65±1.72)%；檢出限為101cfu/mL:因此,VhDM對海產(chǎn)品中霍利斯弧菌分離鑒別與檢測是可行的,且具有操作簡便、經(jīng)濟(jì)、結(jié)果易于觀察等優(yōu)點(diǎn)。

2河弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制基于河弧菌的基礎(chǔ)營養(yǎng)和特殊生態(tài)環(huán)境需求,優(yōu)化了其增菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。通過單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面組合試驗(yàn)得到如下結(jié)果：培養(yǎng)基組成成分為混合蛋白胨2.24%(胰蛋白胨：魚蛋白胨為1：3)、酵母浸膏0.204%、NaCl1.81pH8.0；培養(yǎng)溫度為36±1℃。經(jīng)過8h增菌后,該培養(yǎng)基的菌液濃度是GB/T4789.7-2008中規(guī)定方法的堿性蛋白胨水(APW)增菌菌液濃度的1.59倍,增菌效果明顯。以河弧菌特有的酶系統(tǒng)及其代謝特點(diǎn)和對某些特定抑菌成分的抵抗力為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)研制了河弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基(VfDM)。試驗(yàn)中對VfDM的顯色效果、平板效率、靈敏度和特異性進(jìn)行評價(jià)。

結(jié)果顯示：VfDM對河弧菌具有較好的選擇性和特異性；用VfDM在36±1℃培養(yǎng)18h-24h,河弧菌菌落為深褐色；其它各種弧菌及非弧菌屬致病菌菌落呈紅色或未形成有效的可見菌落；VfDM對河弧菌的出菌效率與嗜鹽瓊脂相比為(92.80±2.88)%；檢出限為101cfu/mL;因此,VfDM對海產(chǎn)品中河弧菌分離鑒別與檢測是可行的,且具有操作簡便、經(jīng)濟(jì)、結(jié)果易于觀察等優(yōu)點(diǎn)。

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