簡(jiǎn)介

D-(+)-蘋果酸主要應(yīng)用于手性藥物合成、手性拆分試劑和手性助劑等領(lǐng)域，其高效制備技術(shù)的研究正越來越受到關(guān)注。D-蘋果酸是重要的手性化合物，廣泛用于手性藥物、手性添加劑、手性助劑等領(lǐng)域，具有重要的開發(fā)和應(yīng)用前景。D-蘋果酸的市場(chǎng)需求：D-蘋果酸目前在國外主要用于藥物的合成，國際市場(chǎng)的需求量約有50噸/年，現(xiàn)售價(jià)售價(jià)高于30萬元/噸。項(xiàng) 目研究的工作基礎(chǔ)：南京工業(yè)大學(xué)已完成了D-蘋果酸的實(shí)驗(yàn)室研究工作，包括高活性酶的篩選、酶催化劑的制備及轉(zhuǎn)化，產(chǎn)物積累濃度高于200g/L，收率已達(dá)到80％[1]。

合成

圖1 D-(+)-蘋果酸的合成路線

將培養(yǎng)基A中生長(zhǎng)的微生物接種到培養(yǎng)基B（細(xì)菌）或培養(yǎng)基C（酵母）中。將微生物在26°C、220 rpm下培養(yǎng)24小時(shí)。用50mM磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）在300ml燒瓶中從30ml培養(yǎng)物中洗滌收獲的細(xì)胞。將收獲的細(xì)胞懸浮于10ml含有0.1%NaCl和1%DL馬來酸的pH7.0-50mM磷酸鹽緩沖液中。將含有5 ml反應(yīng)混合物的大試管在26°C、295 rpm下培養(yǎng)48小時(shí)。最后通過硅膠柱層析得到標(biāo)題化合物D-(+)-蘋果酸。合成路線如圖1所示[2]。

圖2 D-(+)-蘋果酸的合成路線

進(jìn)行包含10g DL蘋果酸、7g K2HPO4、2g（NH4）2SO4和0.1g MgSO4·7H2O的介質(zhì)A在1L蒸餾水中的反應(yīng)。高壓滅菌前，用NaOH將介質(zhì)的pH值調(diào)節(jié)至pH 7.2。進(jìn)行介質(zhì)B的反應(yīng)，介質(zhì)B包括在1L蒸餾水中的100g DL馬來酸二鈉、2g（NH4）2SO4、1.4g KH2PO4、3.1g Na2HPO4?12H2O和0.25g MgSO4?7H2O。在高壓滅菌之前，將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至pH 7.2。在含有30 ml培養(yǎng)基的300 ml錐形燒瓶中培養(yǎng)微生物，溫度為26°C，旋轉(zhuǎn)振蕩（220 r.p.m）。將A.lwofii ATCC 9036在培養(yǎng)基A中培養(yǎng)7天。最后通過硅膠柱層析得到標(biāo)題化合物D-(+)-蘋果酸。合成路線如圖1所示。

參考文獻(xiàn)

[1]D-(+)-蘋果酸. 江蘇省,南京工業(yè)大學(xué),2005-01-01.

[2]Miyama, Masayo; et al. D-Malic acid production from DL-malic acid by enantiospecific assimilation with Acinetobacter lwoffi. Biotechnology Letters (1993), 15(1), 23-8