背景及概述^[1][2]

鹽酸萬古霉素是放線菌屬東方擬無枝酸菌在控制發(fā)酵條件下產(chǎn)生的一種兩性糖肽類抗生素。已知鹽酸萬古霉素與黏肽的前質(zhì)末端D-Ala-D-Ala結(jié)合，抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。此外，鹽酸萬古霉素還可以改變細(xì)胞膜的滲 透性和RNA的合成。鹽酸萬古霉素特別用于由抗β-乳胺抗生素的葡萄球菌引起的嚴(yán)重或重癥感染的初步治療，也用于治療對青霉素過敏或使用青霉素和頭孢菌素沒有效果的患者。

早期有文獻(xiàn)報道認(rèn)為鹽酸萬古霉素有嚴(yán)重的腎、耳毒性，故在臨床上未被廣泛使用，但近來由于抗生素的大量使用，導(dǎo)致臨床上耐甲氧西林金葡菌（MASA）感染病例日益增多，使得鹽酸萬古霉素的使用量逐年增長。因此，降低鹽酸萬古霉素的使用毒性，增加用藥的安全性變得非常重要，而其中提 高藥用鹽酸萬古霉素的純度是其中的一種有效的手段。

近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，技術(shù)人員不斷的提高了鹽酸萬古霉素的純度，過去認(rèn)為鹽酸萬古霉素所具有的嚴(yán)重的腎、耳毒性在不斷的減少?；谝陨显?，開發(fā)一種更高純度、簡易可行、適于工業(yè)化生產(chǎn)的鹽酸萬古霉素精制工藝有著十分重要的意義。

規(guī)格^[3]

膠囊劑：0.12g；0.25g。注射劑：0.5g；1g。

用法用量^[3]

口服(治療偽膜性腸炎)：成人每次0.5g，每6小時1次，每日量不可超過4g。兒童酌減。

靜滴：成人每日2.0g，分2～4次給藥。兒童每日量為40mg/kg，分次給藥。一般將1次量的藥物先用10ml滅菌注射用水溶解，再加入到適量等滲氯化鈉注射液或葡萄糖注射液中，滴注持續(xù)時間不少于1小時。如采取連續(xù)滴注給藥，則可將一日量藥物加到24小時內(nèi)所用的輸液中給予。

應(yīng)用^[3]

適用于葡萄球菌(包括耐青霉素和耐新青霉素株)、難辨梭狀芽胞桿菌等所致的感染和腸道感染，如心內(nèi)膜炎、敗血癥、偽膜性腸炎等。本品的結(jié)構(gòu)特殊，與其他抗生素?zé)o交叉耐藥性。

藥理作用 ^[3]

本品是由東方鏈霉菌(S.orientalis)培養(yǎng)液中所得的一種無定形糖肽類抗生素?？膳c細(xì)菌細(xì)胞壁的前體肽聚末端的丙氨酰丙氨酸高度的結(jié)合，進(jìn)而抑制細(xì)菌細(xì)胞壁糖肽聚合物的合成，因而妨礙細(xì)胞壁的形成。對化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等有強(qiáng)力的抗菌作用。厭氧鏈球菌、難辨梭狀芽胞桿菌、炭疽桿菌、放線菌、白喉桿菌、淋球菌對本品也甚敏感。對多數(shù)革蘭陰性菌、分枝桿菌屬、立克次體屬、衣原體屬或真菌均無效?？诜詹患?，靜注分布廣泛。

不良反應(yīng)^[4]

發(fā)生率較低者為聽力減退、耳鳴、耳部飽滿感、血尿、排尿次數(shù)或尿量顯著增多或減少、食欲減退、惡心或嘔吐、極 度口渴、軟弱、呼吸困難、嗜睡；②“紅頸綜合征”表現(xiàn)發(fā)生率少，多見于快速大劑量注射后，癥狀有食欲不佳、寒戰(zhàn)或發(fā)熱、昏厥、瘙 癢、惡心或嘔吐、心跳加速、皮疹或面紅，頸根、上身、背、臀等處發(fā)紅或麻刺感(釋放 胺)。

注意事項^[4]

通常作為二線藥物，在常用抗菌藥物無效或不能應(yīng)用時(如偽膜性腸炎時)應(yīng)用。②輸入速度過快可產(chǎn)生紅斑樣或蕁麻疹樣反應(yīng)，皮膚發(fā)紅(稱為紅頸或紅人綜合征)，尤以軀干上部為甚。輸入藥液過濃可致血栓性靜脈炎，應(yīng)適當(dāng)控制藥液濃度和滴速。③不可肌注，因可致劇烈疼痛。④可引起口麻、刺痛感、皮膚瘙癢、嗜酸粒細(xì)胞增多、藥物熱、感冒樣反應(yīng)，以及血壓劇降、過敏性休克反應(yīng)等。⑤可致嚴(yán)重的耳毒性和腎毒性，大劑量和長時間應(yīng)用時尤易發(fā)生。⑥與許多藥物同用，如氯霉素、甾體激素、甲氧苯青霉素等，可增加不良反應(yīng)。含本品的輸液中不得添加其他藥物。

禁忌^[5]

對本品有既往過敏性休克史的患者禁用。下列患者原則不予給藥，若有特殊需要需慎重：對本品、替考拉寧及糖肽類抗生素、氨基糖苷類抗生素有既往過敏史患者。因糖肽類抗生素、替考拉寧或氨基糖苷類抗生素所致耳聾及其他耳聾患者（可使耳聾加重）。 

下列患者應(yīng)慎重給藥：腎功能損害患者（因排泄延遲，藥物蓄積所以應(yīng)監(jiān)測血中藥物濃度慎重給藥）、肝功能損害患者（可加重功能損害）、老年患者（低出生體重兒、新生兒。

制備 ^[1-2]

方法1：一種鹽酸萬古霉素原料生產(chǎn)工藝，包括下列步驟：

①含卡那霉素分離平板的制備：將無菌卡那霉素配成一定濃度的溶液，用0.3μm的無菌微孔濾膜過濾。取其溶液混合至高氏一號培養(yǎng)基配成含一定濃度卡那霉素的分離培養(yǎng)基，制備成為分離平板。

②誘變處理：在待誘變處理的新鮮斜面孢子中加入10毫升無菌水，刮下孢子振蕩30分鐘，過濾后得到單孢子懸浮液。將此單孢子懸浮液置于無菌平板中，緩緩轉(zhuǎn)動下進(jìn)行紫外線照射(紫外燈功率30W、波長253.7nm、照射距離33cm)60秒。按一定比例倍數(shù)稀釋后涂布于分離平板，28℃ 避光培養(yǎng)5-6天。挑選大的菌落接種斜面28℃培養(yǎng)5-6天。

③搖瓶篩選：將經(jīng)自然分離或誘變處理后的單菌落接種斜面28℃培養(yǎng)5-6天后進(jìn)行搖瓶二級發(fā)酵。

④發(fā)酵：發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：甘油6.0％；黃豆餅粉(熱榨) 2.0；KH2PO4 0.02％；MgCl2 0.02％；KNO3 0.6％；CaCO3 0.3％；消前 pH7.2該配方在10L玻璃罐及中試生產(chǎn)中的發(fā)酵水平也基本能夠穩(wěn)定 在2500μg/ml以上。發(fā)酵條件為溫度25-30℃，25℃；pH為6.5 -7.0，6.5；發(fā)酵周期5-8天；通氣量1-1.5∶1(vol∶vol)；攪拌轉(zhuǎn)速：300-400rpm。

⑤分離純化：加入鹽酸酸化預(yù)處理；通過D1300吸附；納濾濃縮脫鹽；Sephadex C25柱層純化；冷凍干燥。Sephadex C25柱層純化的條件為：層析介質(zhì)為：Sephadex C15、:Sephadex C25、Sephadex C50；洗脫劑為0-1mol/L的NH4HCO3水溶液、0-1mol/L的(NH4)2CO3水溶液；洗脫方式為梯度洗脫；洗脫順序為洗脫劑濃度由低到高；洗脫可采用正向或反向；洗脫溫度為4-25℃。

方法2：一種高純度（色譜純度達(dá)到99%以上）、低雜質(zhì)、 高效率的適用于商業(yè)化生產(chǎn)的鹽酸萬古霉素的分離純化方法，所述分離純化方法包括如下步驟：     

1）萬古霉素粗品通過離子色譜交換層析法制備得到鹽酸萬古霉素溶液，并通過納濾脫鹽濃縮，得到鹽酸萬古霉素濃縮液；

2）用鹽酸溶液調(diào)節(jié)鹽酸萬古霉素濃縮液 pH=3.5-4.5，再將調(diào)節(jié)后的鹽酸萬古霉素濃縮液通過反相色譜層析柱進(jìn)行柱層析，其中，固定相為C18硅膠或聚苯乙烯聚合物，流動相為含有銨鹽的甲醇水溶液或乙醇水溶液；

3）收集萬古霉素B含量 大于98.5%的層析液；

4）用鹽酸調(diào)節(jié)上述層析液pH=2.5-3.5，再用納濾濃縮脫除溶劑和鹽，以得到第二鹽酸萬古霉素濃縮液；

5） 將步驟（4）的第二鹽酸萬古霉素濃縮液精制脫水以得到色譜純度達(dá)到99%，純白的鹽酸萬古霉素粉。

主要參考資料

[1] CN01132048.6 鹽酸萬古霉素原料生產(chǎn)工藝

[2] CN201310537310.2 一種高純度鹽酸萬古霉素的分離純化方法

[3] 醫(yī)師案頭用藥參考 

[4] 中國藥房調(diào)劑