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異硫氰酸熒光素酯標(biāo)記法的研究

2022/12/6 9:02:51

枸杞(L.barbarum)因其具有抗衰老、抗氧化、抗糖尿病、抗癌、細(xì)胞保護(hù)、神經(jīng)保護(hù)和免疫調(diào)節(jié)作用等健康益處而被用作藥物或藥用和功能性食品。枸杞多糖(LBPs)是從枸杞中分離得到的主要成分,對(duì)枸杞的生物活性起著重要作用。作為一種天然存在的化學(xué)物質(zhì),LBPs是一組分子量(Mw)為3-2 300 kDa的水溶性糖綴合物。由于LBPs具有多種藥理作用,包括抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、改善腸道菌群和生殖保護(hù),LBPs已在中國(guó)的健康食品和藥物中得到廣泛應(yīng)用。盡管已經(jīng)對(duì)LBP進(jìn)行了全面的藥理學(xué)研究,但鑒于這些化合物的高分子量,關(guān)于這些化合物在體內(nèi)的組織分布研究的信息仍然有限。因此,詳細(xì)了解其作用機(jī)制對(duì)于了解其生物活性非常重要。

研究

大多數(shù)已發(fā)表的關(guān)于多糖藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布的研究使用了許多分析方法來(lái)跟蹤體內(nèi)多糖,包括熒光標(biāo)記結(jié)合色譜、同位素標(biāo)記、分光光度法、熒光分光光度法和生物測(cè)定法。最近,基于熒光檢測(cè)的技術(shù)因其特異性、靈敏度和低檢測(cè)閾值而被用于藥物微量分析。異硫氰酸熒光酯素(FITC)是熒光免疫分析中常見(jiàn)的熒光探針,廣泛用于蛋白質(zhì)的熒光標(biāo)記。FITC是一種用于與其他類型的生物材料或生物分子結(jié)合成像的示蹤劑。LBPs是一種水溶性蛋白質(zhì)-多糖復(fù)合物,由葡萄糖、甘露糖和半乳糖醛酸聚合而成。由于異硫氰酸酯基(N=C=S)與氨基的高反應(yīng)性,F(xiàn)ITC廣泛用于蛋白質(zhì)標(biāo)記。用FITC對(duì)LBPs中的游離氨基進(jìn)行修飾,得到具有共價(jià)結(jié)合熒光素和糖基的可溶性共聚物。有研究人員已根據(jù)高效凝膠滲透色譜熒光檢測(cè)(HPGPC-FD)方法成功合成了FITC標(biāo)記的LBPs,熒光標(biāo)記產(chǎn)品(LBP-FITC)的Mv與LBPs相比沒(méi)有增加。

異硫氰酸熒光酯素的產(chǎn)品圖.jpeg

本研究在FITC預(yù)標(biāo)記的基礎(chǔ)上建立了LBP的定量測(cè)定方法,并對(duì)其在大鼠體內(nèi)的組織分布進(jìn)行了研究。了解LBP在體內(nèi)的組織分布及其潛在的作用靶點(diǎn)具有重要意義,有助于進(jìn)一步研究其藥理活性。

本報(bào)告是首次通過(guò)FITC熒光標(biāo)記對(duì)LBPs進(jìn)行研究,以揭示其在大鼠口服給藥后的重要基本組織分布。該實(shí)驗(yàn)證明LBP-FITC主要被小腸和胃吸收,主要通過(guò)腎臟通過(guò)尿液排泄;LBP組織分布的這種明顯差異可歸因于這些LBP的大小與腎臟和肝臟血管床的孔徑有關(guān)。本研究的結(jié)果為L(zhǎng)BPs的傳統(tǒng)使用提供了額外的科學(xué)數(shù)據(jù),這些知識(shí)將使我們能夠全面了解口服LBPs后的生物學(xué)效應(yīng)。

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